1-2-11-1- تاثیر بر تحرک اسپرم. 18

1-2-11-2- تاثیر بر روی کاهش آسیب­های بعد از انجماد اسپرم. 18

1-2-11-3- تاثیر آنتی­اکسیدان­ها در جلوگیری از آسیب بهDNA… 18

1-2-12- نقش آنتی­اکسیدان­ها (رباینده­های­بالقوهROS) دراسپرم. 19

3-1- ژنتیک و ناباروری مردان.. 20

1-3-1- ژن انتخابی مورد مطالعه. 21

1-4- اهداف: 22

1-5-فرضیات: 22

فصل دوم مروری بر مطالعات گذشته24

فصل سوم مواد و روش­ها

3-1- تعیین گروه­های آزمایشی.. 30

3-2- جمع آوری نمونه­ها و محل انجام آزمایش…. 30

3-3- القاء استرس اکسیداتیو با تزریق t-BHP.. 31

3-4-  تک سلول کردن بافت بیضه. 31

3-5- شمارش تعداد سلول­های زنده در بافت بیضه. 32

3-6-1- روش فلوسایتومتری.. 32

 

3-6-2-  سنجش ROS در بیضه بوسیله فلوسایتومتری.. 34

3-7- روشهای تعیین آسیب DNA اسپرم. 35

3-7-1- تست TUNEL جهت ارزیابی شکست  DNAاسپرم. 36

3-7-2- جمع‌آوری سلول‌های اسپرمی جهت آنالیز شکستهای DNA اسپرم. 37

3-7-3-  محلولها و بافرهای مورد نیاز جهت روش TUNEL، به منظور ارزیابی شکست DNA اسپرم. 39

3-7-4- مراحل انجام آزمایش TUNEL.. 39

3-7-5- نحوه استفاده از کیت TUNEL.. 40

3-8-  بررسی بیان ژن Kdm5d یا Smcy. 40

3-8-1- استخراج RNA به روش ترایزول.. 41

3-8-2- بررسی کیفی RNAهای استخراج شده به وسیله الکتروفورز روی ژل آگارز 42

3-8-3- تیمار کردن نمونه­های RNAی استخراج شده 43

3-8-4-  سنتزDNA  مکمل (cDNA) از روی الگوی RNA… 44

3-8-5- روش انجام واکنش زنجیرهای پلی مراز (PCR) جهت اطمینان از سنتز cDNA… 46

3-8-6-روش تهیه­ی ژل آگارز و انجام الکتروفورز 48

3-8-7- طرز تهیه­ی محلول­ها 48

1- بافر50x TAE.. 48

2- محلول رنگ آمیزی اتیدیوم برماید (10mg/ml) 48

3-8-8- بررسی کمی بیان ژن با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلیمرازپیوسته. 49

3-8-8-1-روش C_t مقایس­های برای کمی سازی نسبی.. 50

3-8-6- آنالیز آماری.. 52

فصل چهارم نتایج

4-1-  بررسی وزن بدن و بافت بیضه پس از 14 روز تزریق.. 54

4-2- بررسی ماکروسکوپی بافت بیضه. 55

4-3- بررسی میزان ROS در بیضه­ی گروه کنترل و آزمون.. 56

4-3-1- اندازه گیری میزان O₂ و H₂O₂ 56

4-4-  نتایج ارزیابی شکست DNA اسپرم با تست TUNEL.. 59

4-5- بررسی وضعیت بیانی ژن Kdm5d در بافت بیضه. 61

4-5-1- استخراج RNA کل از بافت بیضه. 61

4-5-2- بررسی صحت سنتز cDNA… 62

یک مطلب دیگر :

4-5-3- بررسی بیان کمی ژن Kdm5d در بافت بیضه. 63

فصل پنجم بحث و نتیجه­گیری

5-1- بحث و نتیجه گیری کلی.. 67

5-2- پیشنهادات: 70

منابع.. 71

خلاصه انگلیسی… 80

ضمائم.. 81

فهرست جداول

عنوان                                                                     صفحه

جدول 1-1: انواع آنتی­اکسیدان­ها و مکانیسم عملکرد آنها 17

جدول 3-1: ترکیب محیط TCM…. 38

جدول 3-2: ترکیب محیط 38

جدول 3-3: ژن مورد نظر و توالی پرایمر مورد استفاده 40

جدول 3-4: مواد مورد استفاده در تیمار نمونه­هایRNA… 43

جدول 3-5: مواد مورد استفاده در سنتزcDNA… 45

جدول 3-6: برنامه دمایی سنتز cDNA… 45

جدول 3-7: مواد مورد استفاده در RT-PCR… 47

جدول 3-8: برنامه دمایی RT-PCR و تعداد سیکل­های هر مرحله. 47

جدول 3-9: اجزای لازم برای انجام واكنش  Real-Time PCR… 51

جدول 3-10: برنامه دمایی Real-Time PCR… 51

جدول 4-1: میانگین وزن بدن در طول تزریق و بافت بیضه پس از 14 روز تزریق.. 54

جدول 4-2: میزان درصد H2O2 و O2 موجود در دو گروه کنترل و آزمون در نمونه­های بیضه­ای با استفاده از تکنیک فلوسایتومتری.. 58

جدول 4-3: درصد شکست DNA اسپرم با روش TUNEL در گروه کنترل و آزمون.. 60

جدول 4-4: داده­های گزارش شده برای آنالیز کمی ژن Kdm5d.. 64

جدول 4-5: آنالیز نتایج  Real-Time PCR با استفاده از نرم افزار REST.. 64

فهرست اشکال

عنوان                                                                                                صفحه

شکل 1-1: ارتباط بین  ATMو P53 در پاسخ­های ترمیم DNA یا آپوپتوز حاصل از آسیب ایجاد شده توسط استرس اکسیداتیو. 9

شکل 1-2: ارتباط بین افزایش تولید ROS با ناباروری.. 15

شکل 1-3: فشردگی کروماتین قبل از ورود به میوز توسط کمپلکس Smcy-MSH5.. 21

شکل 3-1: شمایی از لام نئوبار 32

شکل 3-2: DCFH-DA و مکانیسم عمل آن.. 34

شکل 3-3: روش­های ارزیابی شکست DNA و نحوه تشخیص آن­ها 36

شکل3-4: اساس روش TUNEL.. 37

شکل 4-1: نمونه­های بافت بیضه در موش­های کنترل و آزمون.. 56

شکل 4-2: ارزیابی آسیب DNA در نمونه آزمون با روش TUNEL با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت(1000×) 60

شکل 4-3: نمونه RNA­های استخراج شده از بافت بیضه. 62

شکل 4-4: محصولات RT-PCR. 63

شکل 4-5: منحنی تفکیک ژن مربوطه. 65

فهرست نمودار

عنوان                                                                                                 صفحه

1-2-12- نقش آنتی­اکسیدان­ها (رباینده­های­بالقوهROS) دراسپرم. 19

3-1- ژنتیک و ناباروری مردان.. 20

1-3-1- ژن انتخابی مورد مطالعه. 21

1-4- اهداف: 22

1-5-فرضیات: 22

فصل دوم مروری بر مطالعات گذشته

2-1-  مروری بر مطالعات علمی گذشته. 24

فصل سوم مواد و روش­ها

3-1- تعیین گروه­های آزمایشی.. 30

3-2- جمع آوری نمونه­ها و محل انجام آزمایش…. 30

3-3- القاء استرس اکسیداتیو با تزریق t-BHP.. 31

3-4-  تک سلول کردن بافت بیضه. 31

3-5- شمارش تعداد سلول­های زنده در بافت بیضه. 32

3-6-1- روش فلوسایتومتری.. 32

 

3-6-2-  سنجش ROS در بیضه بوسیله فلوسایتومتری.. 34

3-7- روشهای تعیین آسیب DNA اسپرم. 35

3-7-1- تست TUNEL جهت ارزیابی شکست  DNAاسپرم. 36

3-7-2- جمع‌آوری سلول‌های اسپرمی جهت آنالیز شکستهای DNA اسپرم. 37

3-7-3-  محلولها و بافرهای مورد نیاز جهت روش TUNEL، به منظور ارزیابی شکست DNA اسپرم. 39

3-7-4- مراحل انجام آزمایش TUNEL.. 39

3-7-5- نحوه استفاده از کیت TUNEL.. 40

3-8-  بررسی بیان ژن Kdm5d یا Smcy. 40

3-8-1- استخراج RNA به روش ترایزول.. 41

3-8-2- بررسی کیفی RNAهای استخراج شده به وسیله الکتروفورز روی ژل آگارز 42

3-8-3- تیمار کردن نمونه­های RNAی استخراج شده 43

3-8-4-  سنتزDNA  مکمل (cDNA) از روی الگوی RNA… 44

3-8-5- روش انجام واکنش زنجیرهای پلی مراز (PCR) جهت اطمینان از سنتز cDNA… 46

3-8-6-روش تهیه­ی ژل آگارز و انجام الکتروفورز 48

3-8-7- طرز تهیه­ی محلول­ها 48

1- بافر50x TAE.. 48

2- محلول رنگ آمیزی اتیدیوم برماید (10mg/ml) 48

3-8-8- بررسی کمی بیان ژن با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلیمرازپیوسته. 49

3-8-8-1-روش C_t مقایس­های برای کمی سازی نسبی.. 50

3-8-6- آنالیز آماری.. 52

فصل چهارم نتایج

4-1-  بررسی وزن بدن و بافت بیضه پس از 14 روز تزریق.. 54

4-2- بررسی ماکروسکوپی بافت بیضه. 55

4-3- بررسی میزان ROS در بیضه­ی گروه کنترل و آزمون.. 56

4-3-1- اندازه گیری میزان O₂ و H₂O₂ 56

4-4-  نتایج ارزیابی شکست DNA اسپرم با تست TUNEL.. 59

4-5- بررسی وضعیت بیانی ژن Kdm5d در بافت بیضه. 61

4-5-1- استخراج RNA کل از بافت بیضه. 61

4-5-2- بررسی صحت سنتز cDNA… 62

یک مطلب دیگر :

4-5-3- بررسی بیان کمی ژن Kdm5d در بافت بیضه. 63

فصل پنجم بحث و نتیجه­گیری

5-1- بحث و نتیجه گیری کلی.. 67

5-2- پیشنهادات: 70

منابع.. 71

خلاصه انگلیسی… 80

ضمائم.. 81

فهرست جداول

عنوان                                                                              صفحه

جدول 1-1: انواع آنتی­اکسیدان­ها و مکانیسم عملکرد آنها 17

جدول 3-1: ترکیب محیط TCM…. 38

جدول 3-2: ترکیب محیط 38

جدول 3-3: ژن مورد نظر و توالی پرایمر مورد استفاده 40

جدول 3-4: مواد مورد استفاده در تیمار نمونه­هایRNA… 43

جدول 3-5: مواد مورد استفاده در سنتزcDNA… 45

جدول 3-6: برنامه دمایی سنتز cDNA… 45

جدول 3-7: مواد مورد استفاده در RT-PCR… 47

جدول 3-8: برنامه دمایی RT-PCR و تعداد سیکل­های هر مرحله. 47

جدول 3-9: اجزای لازم برای انجام واكنش  Real-Time PCR… 51

جدول 3-10: برنامه دمایی Real-Time PCR… 51

جدول 4-1: میانگین وزن بدن در طول تزریق و بافت بیضه پس از 14 روز تزریق.. 54

جدول 4-2: میزان درصد H2O2 و O2 موجود در دو گروه کنترل و آزمون در نمونه­های بیضه­ای با استفاده از تکنیک فلوسایتومتری.. 58

جدول 4-3: درصد شکست DNA اسپرم با روش TUNEL در گروه کنترل و آزمون.. 60

جدول 4-4: داده­های گزارش شده برای آنالیز کمی ژن Kdm5d.. 64

جدول 4-5: آنالیز نتایج  Real-Time PCR با استفاده از نرم افزار REST.. 64

فهرست اشکال

عنوان                                                                                                                                   صفحه

شکل 1-1: ارتباط بین  ATMو P53 در پاسخ­های ترمیم DNA یا آپوپتوز حاصل از آسیب ایجاد شده توسط استرس اکسیداتیو. 9

شکل 1-2: ارتباط بین افزایش تولید ROS با ناباروری.. 15

شکل 1-3: فشردگی کروماتین قبل از ورود به میوز توسط کمپلکس Smcy-MSH5.. 21

شکل 3-1: شمایی از لام نئوبار 32

شکل 3-2: DCFH-DA و مکانیسم عمل آن.. 34

شکل 3-3: روش­های ارزیابی شکست DNA و نحوه تشخیص آن­ها 36

شکل3-4: اساس روش TUNEL.. 37

شکل 4-1: نمونه­های بافت بیضه در موش­های کنترل و آزمون.. 56

شکل 4-2: ارزیابی آسیب DNA در نمونه آزمون با روش TUNEL با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت(1000×) 60

شکل 4-3: نمونه RNA­های استخراج شده از بافت بیضه. 62

شکل 4-4: محصولات RT-PCR. 63

شکل 4-5: منحنی تفکیک ژن مربوطه. 65

فهرست نمودار

عنوان                                                                                                                                   صفحه

 

یک مطلب دیگر :

3-5-4  اتصالات صلب (طراحی الاستیك) 105
3-5-5  اتصالات برای طراحی خمیری.. 105
3-5-6  عوامل مهم در طرحی اتصالات… 106
3-6   روشها و دتایلهای اجرایی.. 111
3-6-1  اتصال ساده تیر به ستون توسط جفت نبشی جان : 111
3-6-2  اتصال ساده تیر به ستون توسط نبشی نشیمن انعطاف پذیر : 113
3-6-3  اتصال ساده تیر به ستون با نبشی نشیمن تقویت شده (سخت شده): 113
3-6-4  اتصال صلب تیر به ستون : 114
3-6-5  اتصال قیچی (خورجینی) 115
3-7    نرم افزار ANSYS. 116
فصل  4.. 120
4-1   مقدمه. 120
4-2   مدل اجزاء محدود. 123

 

4-3   مدل ها 124
4-3-1  تحلیل غیر خطی هندسی و مصالح.. 125
4-3-2  بارگذاری   126
4-3-3  اشکال مختلف  سخت كننده های مدلسازی شده 126
4-3-4  خروجی های نرم افزار 128
فصل  5.. 144
5-1   منحنی های ممان-دوران اتصالات… 144
5-2   منحنی های تنش…. 145
5-3    تجزیه و تحلیل نتایج.. 146
5-4   نتیجه گیری.. 148
5-5   پیشنهادات… 149

یک مطلب دیگر :

فصل  6.. 150
1مقدمه و کلیات
1-1   مقدمه
معمولا از اتصالات تیر به ستونهای زوج با صفحات اتصال بالا و پایین (شكل ١)به عنوان اتصالات صلب یاد می شود .
در سازه های معمولی این اتصالات بدلیل سادگی اجرا و هزینه كم نسبت به سایر اتصالات بیشتر مورد استفاده قرار میگیرند . از عوامل ضعف این اتصال جدا شدن صفحه تقویتی ستون از بال ستون و كمانش جان ستون میباشد . به همین دلیل از یك سری سخت كننده در محل اتصال استفاده می شود .
اتصالات صلب با صفحات اتصال بالا و پایین رفتار بسیار پیچیده ای دارند و عوامل زیادی بر رفتار آنها اثر میگذارند از مهمترین آنها شكل وآرایش سخت كننده ها میباشد . بهترین روش برای بررسی این اتصالات انجام آزمایش است ولی این آزمایشات اغلب پرهزینه و وقتگیر هستند. در این مقاله با استفاده از نرم افزار    ANSYS  كه توانایی تحلیل غیر خطی مسائل را به روش اجزا ء محدود دارد , نخست اتصالات صلبی مدلسازی شده است. برای آنالیز اتصالات از تحلیل غیر خطی هندسی و مصالح استفاده شده است به همین منظور در ابتدا نمونه هایی از ورقها و پروفیل های اتصال بریده شده و تحت آزمایش كشش قرار گرفته اند . با تغییر در شكل و آرایش سخت كننده ها , یك سخت كننده كه تاثیر مناسبتری در افزایش سختی و مقاومت نهایی اتصال , نسبت به سخت كننده ها دارد معرفی شده است . منحنی های ممان -دوران اتصالات با توجه به انواع سخت كننده ها (سخت كننده های متداول و پیشنهادی)ارائه شده و سختی و مقاومت نهایی آنها مورد بررسی قرار گرفته است.
شکل ‏1‑1 اتصال صلب جوشی
1-2   هدف از تحقیق
1-2-1                   اهداف کلی:

• رسیدن به مدل مطلوب با مقاوت وشکل پذیری مناسب.

1-2-2                   اهداف اختصاصی:

• مدلسازی سخت کننده ها با اندازه های متفاوت
• تحلیل غیر خطی مدلهای بند 1 با استفاده از نرم افزار ANSYS
• مقایسه نتایج حالات مختلف برای رسیدن به مدل مطلوب با مقاوت وشکل پذیری مناسب.

1-3   فرضیه های پژوهش

2-6-2 کاربرد FRP در تقویت دیوارهای برشی   26
2-6-3 کاربرد FRP در تقویت دال‌ها 26
2-6-4 کاربرد FRP در تقویت اتصالات   27
2-6-5 کاربرد FRP درتقویت برشی و خمشی تیرها 27
2-7 روشهای نصب مصالح FRP درسازه‌های بتنی.. 29
2-7-1 روش اتصال خارجی (EBR) 29
2-7-2روش تعبیه در نزدیک سطح (NSM) 31

 

2-7-3 مودهای گسیختگی برشی در تیر تقویت‌شده با مصالح FRP  34
2-7-3-1 انواع مكانیزم برشی تیر تقویت‌شده به روش EBR   34
2-7-3-1-1 گسیختگی برشی با پارگی ورق FRP  34
2-7-3-1-2 گسیختگی برشی بدون پارگی ورق FRP  35
2-7-3-1-3 گسیختگی برشی ناشی از عدم پیوند یا چسبندگی ورق FRP  35
2-7-3-1-4 گسیختگی نزدیک مهار مکانیکی   35
2-7-3-1-5 گسیختگی محلی   35
2-7-3-2 انواع مكانیزم شکست تیر تقویت‌شده به روش NSM    36
2-7-4 مزایای روش تعبیه در نزدیک سطح   36
2-8 بررسی تحقیقات انجام شده. 37
فصل سوم. 49

یک مطلب دیگر :

تشریح آزمایشهای انجام شده. 49
3-1 مقدمه. 50
3-2 خواص مصالح مصرفی.. 51
3-3 روش انجام مقاوم‌سازی.. 53
3-4 مشخصات تیرهای آزمایش‌شده. 56
3-5 انجام آزمایش…. 58
3-6 مد گسیختگی.. 60
3-7 بار نهایی تیرها 62
3-8 نتیجه‌گیری.. 65
فصل چهارم. 67
تشریح مدل‌سازی عددی.. 67
4-1 مقدمه. 68
4-2 نمونه آزمایشگاهی.. 69
4-3 مشخصات و نحوه مدل‌سازی.. 70
4-4 بررسی نتایج مدل سازی عددی با نتایج آزمایشگاهی.. 74
4-5 مدل سازی عددی جهت بررسی آرایش بهینه نصب مصالح FRP. 75
4-5-1 تشریح تیرهای مدل شده  75
4-5-2 مدل‌سازی عددی تیرها 80
4-6 محاسبه‌ی نیروی برشیFRP در تقویت برشی تیر به روش NSM… 81
4-7 نتایج مدل سازی عددی.. 84
4-7-1 بررسی تاثیر تعداد و فاصله‌‌ی میله GFRP درتقویت برشی تیر به روش NSM    85
4-7-2 بررسی زاویه‌ی نصب میله‌ی GFRP در تقویت برشی تیر به روش NSM    92
4-8 نتیجه گیری.. 100