2-1-8- بقا سالمونلا……………………………………………………………………………………………………..17
2-1-9- منشا سالمونلا…………………………………………………………………………………………………..20
2-2- آلودگی در انسان………………………………………………………………………………………………….21
2-2-1- میزان شیوع سالمونلوز در انسان…………………………………………………………………………22
2-2-2- علائم سالمونلوز در انسان…………………………………………………………………………………23
2-2-3- دوز آلوده کننده……………………………………………………………………………………………….25
2-2-4- پیشگیری………………………………………………………………………………………………………..25
2-3- سالمونلوز در حیوانات…………………………………………………………………………………………26
2-4- سالمونلوز در پرندگان………………………………………………………………………………………….27
2-4-1- آلودگی در طیور………………………………………………………………………………………………27
2-4-2- میزان شیوع…………………………………………………………………………………………………….28
2-5- روش های تشخیص سالمونلا………………………………………………………………………………..29
2-5-1- روش های کشت……………………………………………………………………………………………29
2-5-2- روش سرولوژیکی………………………………………………………………………………………….30
2-5-3- روش الایزا…………………………………………………………………………………………………. 30
2-5-4- روش آگلوتیناسیون به كمك لاتكس………………………………………………………………. 31
2-5-5-1-روشPCR……………………………………………………………………………………………….. 31
2-5-5-2- جستجو وآنالیز محصولاتPCR………………………………………………………………. 31
2-5-5-3- بهبود حساسیت و ویژگی تکثیرPCR………………………………………………………….33
2-5-5-4- اجزای PCR…………………………………………………………………………………………..33
2-5-5-5- سابقه PCR در شناسایی سالمونلا……………………………………………………………….34
فصل سوم:مواد و روش ها ………………………………………………………………………………………….44
3-1- وسایل مورد استفاده…………………………………………………………………………………………..45
3-2- مواد مورد استفاده………………………………………………………………………………………………46
3-3- گرد آوری نمونه های آزمایشی……………………………………………………………………………46
3-4-1- مواد و وسایل لازم برای تهیه محیط…………………………………………………………………46
3-4-2- مواد و وسایل لازم جهت کشت نمونه……………………………………………………………..46
3-4-3- کشت در محیط جامد انتخابی…………………………………………………………………………47
3-5- آزمون های بیوشیمیایی………………………………………………………………………………………47
3-5-1- کشت در محیط آهن دار سه قندی…………………………………………………………………..47
3-5-2- آزمون اوره آز……………………………………………………………………………………………… 48
3-5-3- آزمون وژس پروسکوئر………………………………………………………………………………….48
3-5-4- آزمون اندول…………………………………………………………………………………………………..49
3-5-5- آزمون سیترات………………………………………………………………………………………………49
3-5-6- آزمون حرکت………………………………………………………………………………………………..49
3-6- آزمون رنگ آمیزی گرم……………………………………………………………………………………..49
3-6-1- تهیه گسترش روی لام…………………………………………………………………………………..50
3-6-2- رنگ آمیزی با کریستال ویوله…………………………………………………………………………50
3-6-3- مرحله شستشو……………………………………………………………………………………………..51
3-6-4- مرحله اضافه کردن محلول ید…………………………………………………………………………51
3-6-5- مرحله رنگ بری با استفاده از استن – الکل………………………………………………………51
یک مطلب دیگر :
3-6-6- رنگ آمیزی با فوشین…………………………………………………………………………………….51
3-6-7- خشک کردن لام……………………………………………………………………………………………51
3-6-8-نکات مهمی که هنگام رنگ آمیزی گرم باید مورد توجه قرار گیرد ………………………51
3-7- استخراج DNA………………………………………………………………………………………………52
3 -7-1- مواد و وسایل لازم……………………………………………………………………………………..52
3-8- آزمون PCR………………………………………………………………………………………………….. 52
3-8-1- مواد و وسایل لازم……………………………………………………………………………………….52
3-8-2- روش کار……………………………………………………………………………………………………53
3-9- الکتروفورز محصولاتPCR………………………………………………………………………………54
3-9-1- مواد و وسائل لازم……………………………………………………………………………………….54
3-9-2- تهیه بافر 1x………………………………………………………………………………………………..55
3-9-3- تهیه ژل آگاروز……………………………………………………………………………………………55
3-8-4- بارگذاری محصولات ……………………………….PCR…………………………55
3-10- مشاهده باند های روی ژل………………………………………………………………………………56
3-10-1- مواد و وسایل لازم…………………………………………………………………………………….56
فصل چهارم :نتایج
4-1 نتایج………………………………………………………………………………………………………………..58
4-2- کشت در محیط جامد انتخابی……………………………………………………………………………58
4-2-1- کشت در محیط XLD ………………………………………………………………………………..58
4-2-2-کشت در محیط سالمونلا شیگلا آگار……………………………………………………………….59
4-3-آزمون گرم………………………………………………………………………………………………………..59
4-4-تست های بیو شیمیایی…………………………………………………………………………………………..60
4-4-1-آزمون .TSI……………………………………………………………………………………………………..60
4-4-2-آزمون اوره آز………………………………………………………………………………………………….60
4-4-3-آزمون ..VP…………………………………………………………………………………………………61
4-4-5-آزمون اندول…………………………………………………………………………………………………….61
4-4-6-آزمون سیترات………………………………………………………………………………………………… 61
4-4-7-آزمون حرکت…………………………………………………………………………………………………..62
4-5-استخراج DNA…………………………………………………………………………………………………..63
4-5-1-استخراج توسط KOH 5/0 مولار………………………………………………………………………63
4-6-آزمونPCR…………………………………………………………………………………………………………63
4 -7-نتایج آزمون کای دو……………………………………………………………………………………………67