1-5-2- آلرژی به پروتئینهای شیر……………………………………………………………………………… 16
عنوان صفحه
1-5-2-1- معرفی انواع آزمونهای رایج جهت مطالعهی فرآیند آلرژی……………… 18
1-5-2-2- آزمون الایزا……………………………………………………………………………………………. 19
1-6- قندی شدن غیرآنزیمی پروتئینها……………………………………………………………………………. 20
فصل دوم: مروری بر پژوهشهای پیشین…………………………………………………………. 23
فصل سوم: مواد و روشهای تحقیق
3-1- مواد مصرفی…………………………………………………………………………………… 27
3-2- تهیهی محلولها……………………………………………………………………………. 28
3-2-1- تهیهی محلولهای کازئینی، کازئینبتا و تعیین غلظت آنها………………………. 28
3-2-2- تهیهی محلول برادفورد و رسم نمودار استاندارد آن با
استفاده از کازئینبتا………………………………………………………………………… 28
3-2-3- تهیهی محلولهای مورد نیاز برای الکتروفورز ژلی………………………………………… 30
3-2-3-1-تهیه محلول SDS 20 درصد………………………………………………………………… 30
3-2-3-2- تهیه محلول آمونیوم پر سولفات (APS)……………………………………………… 30
3-2-3-3- تهیه محلول آکریلامید و بیس آکریلامید…………………………………………… 31
3-2-3-4- تهیه بافر تریس 5/1 مولار…………………………………………………………………… 31
3-2-3-5- تهیه بافر تریس 5/0 مولار…………………………………………………………………… 31
3-2-3-6- تهیه بافر تانک به حجم 500 میلیلیتر……………………………………………… 31
3-2-3-7- تهیه بافر نمونه X2………………………………………………………………………………. 32
3-2-3-8- تهیه 100 میلیلیتر محلول کوماسیبلو……………………………………………… 33
3-2-3-9- تهیه محلول رنگ بر ژل………………………………………………………………………… 33
3-2-4- تهیه محلول OPA به حجم 50 میلیلیتر……………………………………………………. 33
3-2-5- تهیه محلول فلورسامین…………………………………………………………………………………… 34
عنوان صفحه
3-2-6- تهیه محلول ANS…………………………………………………………………………………………… 35
3-2-7- تهیه محلول ABTS رادیکال…………………………………………………………………………. 36
3-2-8- تهیه عصارهی ACE از پودر استون شش خرگوش……………………………………… 37
3-3-روشها……………………………………………………………………… 38
3-3-1- تخلیص کازئینبتا شیرگاو……………………………………………………………………………….. 38
3-3-2- تخلیص هموگلوبین A از خون انسان……………………………………………………………. 39
3-3-3- تعیین میزان خلوص پروتئین با استفاده از SDS-PAGE…………………………… 40
3-3-4- تهیه پودر استون شش خرگوش…………………………………………………………………….. 40
3-3-5- قندی کردن کازئینبتا و کازئینهای شیرگاو به روش غیرآنزیمی………………. 41
3-3-6- آزمونهای OPA و فلورسامین برای تایید فرآیند
قندی شدن غیرآنزیمی………………………………………………. 41
3-3-7- مطالعهی فلورسانس ذاتی کازئینهای بتای قندی و غیرقندی……………………. 42
3-3-8- مطالعهی فلورسانس عارضی کازئینهای بتای قندی و غیرقندی……………….. 43
3-3-9- مطالعه تغییرات ساختاری کازئینهای بتای قندی و غیرقندی،
با استفاده از دستگاه دورنگ نمایی دورانی…………………………………………………………………….. 43
3-3-10- مطالعهی فعالیت چاپرونی کازئینهای بتای قندی و غیرقندی………………… 44
3-3-11- هضم کازئینهای شیرگاو و کازئینبتای قندی و غیرقندی
یک مطلب دیگر :
به وسیلهی آنزیمهای تریپسین و کیموتریپسین پانکراس گاوی…………………………………. 44
3-3-12- مطالعهی فعالیت آنتیاکسیدانی کازئینهای شیرگاو کازئینبتای
قندی و غیرقندی………………………………………………………………………… 45
3-3-13- مطالعهی فعالیت مهار آنزیم ACE به وسیلهی کازئینبتا
قندی و غیرقندی و پپتیدهای حاصل از هضم آنزیمی آنها……………………………………… 47
3-3-14- مطالعهی توان آلرژیزایی کازئینها و کازئینبتای قندی
و غیرقندی………………………………………………………………………. 47
عنوان صفحه
3-3-15- آزمون آماری………………………………………………………………….. 48
فصل چهارم: نتایج و بحث
4-1- مطالعه اثر قندی شدن غیرآنزیمی بر ساختار، فعالیتهای زیستی
(چاپرونی، آنتیاکسیدانی و مهار آنزیمACE ) و آلرژیزایی کازئینبتا………………………………. 50
4-1-1- تخلیص پروتئین کازئینبتا………………………………………………………………………………. 50
4-1-2- تخلیص هموگلوبینA از خون انسان……………………………………………………………… 51
4-1-3- مطالعه فرآیند قندی شدن غیرآنزیمی کازئینبتا
در حضور مادهی احیا کننده……………………………………………………………………………………………. 52
4-1-3-1- مطالعهی قندی شدن کازئینبتا با استفاده از ترکیب OPA……………… 53
4-1-3-2- مطالعه فرآیند قندی شدن غیرآنزیمی کازئینبتا با استفاده
از ترکیب فلورسامین…………………………………………………………………………………………………. 54
4-1-3-3- استفاده از ژل SDS-PAGE احیایی برای تایید فرآیند
قندی شدن غیرآنزیمی کازئینبتا……………………………………………………………………………… 55
4-1-4- مطالعهی فلورسانس ذاتی و عارضی کازئینهای بتای قندی و غیرقندی…… 56
4-1-5- مطالعه ساختار دوم کازئینهای بتای قندی و غیرقندی با استفاده
از دستگاه دورنگ نمایی دورانی………………………………………………………………………………………. 58
4-1-6- مطالعه فعالیت چاپرونی کازئینهای بتای قندی و غیرقندی………………………. 60
4-1-7- هضم آنزیمی کازئینهای بتای قندی و غیرقندی با آنزیمهای
تریپسین و کیموتریپسین………………………………………………………………………………………………. 62
4-1-7-1- تایید فرآیند هضم آنزیمی با استفاده از ژلSDS-PAGE
(15درصد) احیایی……………………………………………………………………………………………………… 63
عنوان صفحه
4-1-7-2- مطالعه فعالیت آنتیاکسیدان کازئینهای بتای قندی
و غیرقندی و پپتیدهای حاصل از هضم آنها………………………………………………………… 65
4-1-7-3- مطالعه خاصیت مهار آنزیم ACE به وسیلهی کازئینهای
بتای قندی و غیرقندی و پپتیدهای حاصل از هضم آنزیمی آنها………………………… 71
4-1-8- مطالعه آلرژیزایی کازئینهای بتای قندی و غیرقندی و پپتیدهای
حاصل از هضم آنزیمی آنها…………………………………………………………………………………………… 73
4-2- مطالعه اثر قندی شدن غیرآنزیمی بر ساختار، فعالیت آنتیاکسیدانی
و آلرژیزایی کازئینهای شیرگاو…………………………………………………………………………………………. 77
4-2-1- جداسازی و قندی کردن کازئین شیرگاو……………………………………………………….. 77
4-2-2- تایید فرآیند قندی شدن کازئینهای شیرگاو……………………………………………….. 77
4-2-2-1- استفاده از ژل SDS-PAGE (12 درصد) برای تایید
|
[پنجشنبه 1399-08-01] [ 02:22:00 ق.ظ ]
|
