1-2-6-2 دسته بندی پروتئازها. 17
1-2-7 کاربرد پروتئازها 22
1-2-7-1 صنعت شوینده. 22
1-2-7-2 صنعت چرم. 23
1-2-7-3 صنایع دارویی.. 24
1-2-7-4 صنایع غذایی.. 25
1-2-8 سراشیا مارسسنس… 26
1-2- 9 سراشیاپپتیداز و اهمیت آن. 28
1-2-10 روشهای DNA نوترکیب و اهمیت آن. 29
1-2-11 انتخاب میزبان بیان ژن. 30
1-2- 12راهبردهای نسخه برداری (انتخاب حاملین بیان ژن) 31
1-2-13 سیستم بیانpET.. 32
1-2-14استراتژی خالص سازی محصول نوترکیب.. 34
هدف از انجام پروژه 36
فصل دوم: پیشینه پژوهش
2-1 ادبیات و سوابق مربوطه…39
فصل سوم: روش شناسی
3-1مواد شیمیایی.. 42
3-2 میكروارگانیسم ها ومحیط های كشت مورد استفاده 43
3-2-1 میكروارگانیسم ها و پلاسمیدها. 43
3-2-2محیط های كشت میكروبی.. 44
3-3 روش سنجش فعالیت پروتئاز. 45
3-4 مطالعات اولیه آنزیم شناسی.. 46
3-4-1 اثر دما بر پایداری آنزیم.. 46
3-4-2 اثر pH بر پایداری آنزیم.. 46
3-4-3 دمای بهینه. 47
3-4-4 تعیین پارامترهای سینتیكی آنزیم.. 47
3-5 جداسازی باکتری.. 48
3-5-1 استخراج DNAژنومی.. 48
3-5-2 طراحی پرایمر و انجام PCR… 48
3-5-2-1 مراحل PCR ………..49
3-5-3 کلون سازی ژن سراپپتیداز در وکتورT/A . 50
3-5-4 رسم درخت فیلوژنتیک…. 51
3-5-5 تعیین توالی ژن کدکننده سراپپتیداز. 51
3-6 روشهای الکتروفورزی.. 53
3-6-1 SDS-PAGE.. 53
3-6-2 الکتروفورز ژل آگارز(100). 53
3-7 فنون مربوط به DNA نوتركیب.. 54
3-7-1 ساختار ناقل كلونینگ…. 54
3-7-2 آماده سازی قطعهDNA برای انتقال به درون وكتور. 55
یک مطلب دیگر :
3-7-3 استخراج DNA از روی ژل.. 56
3-7- 4 مراحل کلون مجدد. 56
3-7-5 مستعدکردن باکتری DH5αبه روش استفاده از محلول CaCl2 (M 1/0). 58
3-7-6 انتقال محصول الحاق به درون باکتری مستعدDH5α . 59
3-8 بافرCracking. 60
3- 9بیان ژن سراپپتیداز و تعیین خلوص آن توسطSDS-PAGE 62
3-9-1 القاء باکتری و بیان پروتئین های نوترکیب… 62
3-9-2 بررسی بیان پروتئین های نوترکیب با استفاده از روش الکتروفورز. 63
3-10 تخلیص پروتئین های نوترکیب.. 66
3-10-1 بافرهای موردنیاز تخلیص پروتئین نوترکیب… 66
3-10-2 روش تخلیص پروتئین نوترکیب… 67
فصل چهارم: تجزیه وتحلیل داده ها
4-1 جداسازی باکتری.. 70
4-2 استخراج DNAژنومی.. 70
4-3 رسم درخت فیلوژنتیکی.. 70
4-4 کلون کردن ژن سراپپتیداز در حامل بیانیpET28-a (+) 71
4-5 بیان و تخلیص ژن سراپپتیداز نوترکیب.. 75
4-6 منحنی استاندارد. 77
4-7 اثر pH روی فعالیت آنزیم. 77
4-8 دمای بهینه آنزیم. 78
4 -9 بررسی خصوصویات کاتالیتیک آنزیم……79
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری
5-1 نتیجه گیری نهایی.. 88
5-2 پیشنهادات.. 88
منابع و مأخذ. 89
فهرست منابع انگلیسی….89
فهرست جداول
عنوان شماره صفحه
جدول 3-1 خصوصیات انواع سویه ها و پلاسمیدهای مورد استفاده در پژوهش …………………………………43
جدول 3-2 نسبت های واکنش الحاق …………………………………………………………………………………………..57
فهرست اشکال
عنوان شماره صفحه
شکل 1-1 سیستم بیان pET ……………………………………………………………………………………………………….34
شکل 2-1 ناقل کلونینگPet28a…………………………………………………………………………………………………55
شکل 4-1 درخت فیلوژنتیکی رسم شده با استفاده از NCBI…………………………………………………………..71
شکل 4-2 الکتروفورز محصول واکنش PCR…………………………………………………………………………………72
شکل 4-3 الکتروفورز پلاسمید های استخراج شده از باکتریهای ترانسفورم شده توسط روش Cracking………………………………………………………………………………………………………………………………..73
شکل 4-4 نمونه های پلاسمیدی حاوی ژن…………………………………………………………………………………….74
شکل 4-5 محصول واکنش PCR…………………………………………………………………………………………………75
شکل 4-6 ژل الکتروفورز آنزیم تخلیص شده ………………………………………………………………………………..76
[پنجشنبه 1399-08-01] [ 06:12:00 ب.ظ ]
|