یک مطلب دیگر :

پایان نامه درباره داعش/:هزینه شکل گیری داعش

 

فهرست مطالب
صفحه	عنوان
1	چکیده
2	فصل اول : کلیات تحقیق
3	1-1 . اندومتریوز
4	1-2 . علائم و نشانه ها
4	1-2-1 . درد لگن
5	1-2-2 . ناباروری
5	1-2-3 . دیگر نشانه ها
6	1-3 . عوارض
6	1-4 . ریسک فاکتورها
6	1-4-1 . آلودگی محیط
7	1-4-2 . ژنتیک
11	P53 . 1-2-4-1
15	PAI-1 . 1-2-4-2
16	1-4-3 . پیری
17	1-4-4 . فاکتورهای هورمونی و قاعدگی
17	1-4-5 . فاکتورهای ایمونولوژیکی
18	1-5 . پاتوفیزولوژی
19	1-5-1 . تشکیل آندومتر نابه جا
19	1-5-2 . تئوری قاعدگی برگشتی
21	1-5-3 . تئوری متاپلازی
21	1-5-4 . تئوری انتقال لنف و خون
22	1-5-5 . تئوری جایگزینی تصادفی
22	1-6 . محل بروز
23	1-7 . تشخیص اندومتریوز
24	1-7-1 . مراحل اندومتریوز
25	1-7-2 . مارکرهای اندومتریوز
26	1-7-3 . پاتوفیزیولوژی
26	1-8 . پیشگیری
26	1-9 . درمان
27	1-9-1 . جراحی
28	1-9-2 . درمان داروئی
31	1-9-3 . درمان ناباروری
31	1-10 . اپیدمیولوژی
33	1-11 . اهداف
33	1-11-1 . هدف اصلی
33	1-11-2 . اهداف اختصاصی
34	فصل دوم : مروری بر تحقیقات انجام شده
35	2-1 . مطالعات انجام شده بر روی ژن 53P
39	2-2 . مطالعات انجام شده بر روی ژن l-PAI
44	فصل سوم : مواد و روش ها
45	3-1 . افراد مورد مطالعه و جمع آوری نمونه ها
46	3-2 . استخراج DNA
46	3-2-1 . مواد و وسایل مورد نیاز
47	3-2-2 . تهیه محلول های مورد نیاز
48	3-2-3 . روش کار
49	3-3 . بررسی کیفی و کمی DNA استخراج شده
49	3-3-1 . بررسی کیفی
49	3-3-2 . بررسی کمی
50	3-4 . تعیین ژنوتیپ نمونه ها
50	3-4-1 . طراحی پرایمرها
50	3-4-1-1 . پرایمر کدون 11 ژن 53P
50	3-4-1-2 . پرایمر کدون 72 ژن 53P
50	3-4-1-3 . پرایمر کدون 248 ژن 53P
51	3-4-1-4 . پرایمر ژن l-PAI
51	3-4-2 . PCR
51	-1 . PCR ژن 53P کدون 112-4-3
53	. PCR ژن 53P کدون 722-2-4-3
55	-3 . PCR ژن 53P کدون 2482-4-3
57	-4 . PCR ژن l-PAI2-4-3
59	3-5 . الکتروفورز ژل آگارز
60	3-6 . چند شکلی در طول قطعات محدود (RFLP)
61	3-6-1 . روش کار
61	. 1-1-6-3 RFLP محصول کدون 11 ژن P53 با آنزیم Taq I
61	. 2-1-6-3 RFLP محصول کدون 72 ژن P53 با آنزیم BstUI
62	. 3-1-6-3 RFLP محصول کدون 248 ژن P53 با آنزیم HpaII
62	4-1-6-3  .RFLP محصول جایگاه 675- ژن l-PAI با آنزیم 1-BSI
63	3-7 . الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید
64	3-8 . رنگ آمیزی نیترات نقره
66	فصل چهارم : نتایج
67	4-1 . جمعییت مورد مطالعه
67	4-2 . آنالیز آماری
67	4-3 . نتایج حاصل از بررسی پلی مورفیسم ژن های 53P وI- PAI
67	4-3-1 . نتایج بررسی پلی مورفیسم ژن 53P کدون 11
73	4-3-2 . نتایج بررسی پلی مورفیسم ژن53P کدون 72
78	4-3-3 . نتایج بررسی پلی مورفیسم ژن 53P کدون 248
83	4-3-4 . نتایج بررسی پلی مورفیسم ژن I- PAI
88	فصل پنجم : بحث
90	5-1 . بررسی ارتباط بین واریاسیون های ژن 53P و اندومتریوز
91	5-1-1 . ارتباط پلی مورفیسم کدون 11 ژن 53P با اندومتریوز
91	5-1-2 . ارتباط پلی مورفیسم کدون 72 ژن53P با اندومتریوز
93	5-1-3 . ارتباط پلی مورفیسم کدون 248 ژن 53P با اندومتریوز
94	5-2 . بررسی ارتباط بین واریاسیون های ژن I- PAI و اندومتریوز
97	5-3 . نتیجه گیری کلی
98	6-3 . پیشنهادات
99	فصل ششم : منابع
107	چکیده انگلیسی
	فهرست جداول
46	جدول 2-1 : مواد و وسایل استفاده شده در استخراج
52	جدول 2-2 : غلظت و مقدار مواد استفاده شده در PCR کدون 11 ژن 53P
54	جدول 2-3 : غلظت و مقدار مواد استفاده شده در PCR کدون 72 ژن 53P
56	جدول 2-4 : غلظت و مقدار مواد استفاده شده در PCR کدون 248 ژن 53P
58	جدول 2-5 : غلظت و مقدار مواد استفاده شده در PCR ژن I- PAI
68	جدول 4-1:نتایج فراوانی اللی و فراوانی ژنوتیپی حاصل از بررسی پلی مورفیسم کدون 11 ژن 53P
68	جدول 4-2:نتایج آزمون Square-Chi برای پلی مورفیسم ژن 53P کدون 11
69	جدول 4-3) نتایج آنالیز تعادل هاردی – واینبرگ در جمعیت مربوط به ژن53P کدون 11 گروه بیمار
69	جدول 4-4) نتایج آزمون Square-Chi
70	جدول 4-5) نتایج آنالیز تعادل هاردی – واینبرگ در جمعیت مربوط به ژن53P کدون 11 گروه کنترل
70	جدول 4-6) نتایج آزمون Square-Chi
73	جدول 4-7) نتایج فراوانی اللی و فراوانی ژنوتیپی حاصل از بررسی پلی مورفیسم کدون 72 ژن 53P
74	جدول 4-8) نتایج آزمون Square-Chi برای پلی مورفیسم ژن 53P کدون 72
74	جدول 4-9) نتایج آنالیز تعادل هاردی – واینبرگ در جمعیت مربوط به ژن53P کدون 72 گروه بیمار
75	جدول 4-10) نتایج آزمون Square-Chi
75	جدول 4-11) نتایج آنالیز تعادل هاردی – واینبرگ در جمعیت مربوط به ژن53P کدون 72 گروه کنترل
76	جدول 4-12) نتایج آزمون Square-Chi
78	جدول 4-13) نتایج فراوانی اللی و فراوانی ژنوتیپی حاصل از بررسی پلی مورفیسم کدون 248 ژن 53P
79	جدول 4-14) نتایج آزمون Square-Chi برای پلی مورفیسم ژن 53P کدون 248
79	جدول 4-15) نتایج آنالیز تعادل هاردی – واینبرگ در جمعیت مربوط به ژن53P کدون 248 گروه بیمار
80	جدول 4-16) نتایج آزمون Square-Chi
80	جدول 4-17) نتایج آنالیز تعادل هاردی – واینبرگ در جمعیت مربوط به ژن53P کدون 248 گروه کنترل
81	جدول 4-18) نتایج آزمون Square-Chi
83	جدول 4-19) نتایج فراوانی اللی و فراوانی ژنوتیپی حاصل از بررسی پلی مورفیسم ژن I- PAI
84	جدول 4-20) نتایج آزمون Square-Chi برای پلی مورفیسم ژن I- PAI
84	جدول 4-21) نتایج آنالیز تعادل هاردی – واینبرگ در جمعیت مربوط به ژن I- PAI گروه بیمار
85	جدول 4-22) نتایج آزمون Square-Chi
85	جدول 4-23) نتایج آنالیز تعادل هاردی – واینبرگ در جمعیت مربوط به ژن I- PAI گروه کنترل
86	جدول 4-24) نتایج آزمون Square-Chi
	فهرست شکل
48	شکل 2-1 ) بررسی کیفیت DNA استخراج شده توسط الکتروفورز با ژل آگارز 1%
72	شکل 4-1) نتایج PCR برای ژن 53P کدون 11
72	شکل 4-2)RFLP- PCR برای پلی مورفیسم ژن 53P کدون 11
77	شکل 4-3) نتایج PCR برای ژن 53P کدون 72
77	شکل 4-4)RFLP- PCR برای پلی مورفیسم ژن 53P کدون 72
82	شکل 4-5) نتایج PCR برای ژن 53P کدون 248
82	شکل 4-6)RFLP- PCR برای پلی مورفیسم ژن 53P کدون 248
87	شکل 4-7) نتایج PCR برای ژن I- PAI
87	شکل 4-8)RFLP- PCR برای پلی مورفیسم ژن I- PAI

چکیده

مقدمه : اندومتریوز عبارتست از اختلالی چند عاملی که در آن بافت مشابه پوشش داخلی رحم (آندومتر ) در نقاطی غیرمعمول در حفره داخلی شکم ظاهر می شود که همراه با درد و ناباروری است . عوامل بروز این بیماری تا حد زیادی ناشناخته هستند و بر طبق شواهد اندومتریوز یکی از بیماری های مولتی فاکتوریال و پلی ژنیک به حساب می آید که جنبه ژنتیکی قوی دارد . ژنP53 یک ژن سرکوبگر تومور است که در پرولیفراسیون و رشد سلول و جلوگیری از شکل گیری تومورهای مختلف موثر است و احتمالا تاثیر فراوانی در بروز این بیماری و به دنبال آن ناباروری دارد . ژن PAI1 در تخریب و بازسازی بافت در حالت طبیعی و بیماریزا موثر می باشد . همچنین در تنظیم سیستم فعال کننده پلاسمینوژن نقش دارد . تغییر حالت پروتئولیتیک به عنوان یک عامل خطر در پیشرفت اندومتریوز مورد توجه می باشد . هدف از این مطالعه بررسی همراهی پلی مورفیسم های شایع دو ژن P53 و PAI1 با بیماری اندومتریوز در جمعیت ایرانی است .

مواد و روش ها : در مجموع 150 خانم با تشخیص قطعی اندومتریوز با کمک لاپاروسکوپی به عنوان گروه بیمار و 150 خانم به عنوان گروه کنترل انتخاب شدند . DNA از خون افراد با استفاده از روش استاندارد رسوب نمکی استخراج شد . ژنوتیپ و فراوانی اللی پلی مورفیسم ها با روش PCR-RFLP تعیین گردید . به منظور تجزیه و تحلیل آماری از نرم افزار SPSS20.0 و از آزمون ²χ و محاسبه OR با CI(95%) آن استفاده گردید . P<0.05 به عنوان سطح معنی داری در نظر گرفته شد .

نتایج : ژنوتیپ پلی مورفیسم های ژن P53 ، کدون 11 (GAG/CAG – Glu/Gln) و کدون 72 (CGC/CCC – Arg/Pro) و کدون 248 (CGG /TGG – Arg/Trp) به طور معناداری در گروه بیماران بیشتر از گروه کنترل بود . کدون 11 (P=0.040) و کدون 72 (P=0.10) و کدون 248 (P=0.028) . و در مقابل تفاوت معنی داری بین فراوانی ژنوتیپی واللی در پلی مورفیسم -675 4G/5G در ژن PAI-1 بین گروه بیمار و کنترل مشاهده نشد .

بحث : در این تحقیق فراوانی پلی مورفیسم های ژن P53 در بیماران مبتلا به اندومتریوز افزایش نشان داد که احتمالا نشان دهنده همراهی این ژنوتیپ ها با بیماری اندومتریوز است . همچنین وجود اختلاف معنی داری بین ژنوتیپ های پلی مورفیسم های ژن P53 در گروه بیمار و شاهد نیز تائید کننده این مطالعه است . ولی اختلاف معنی داری بین ژنوتیپ 4G/5G در ژن PAI-1 مشاهده نشد . از آنجائیکه این مطالعه برای اولین بار در جمعیت ایرانی بررسی شد مطالعه جمعیت های بزرگتر برای تائید یافته ها لازم است .

واژه های کلیدی : اندومتریوز ، P53 ، PAI1 ، مهارکننده فعال کننده پلاسمینوژن ، پلی مورفیسم

•  اندومتریوز :

اندومتریوز یکی از بیماریهای شایع زنان است که در آن سلول ها از پوشش داخلی رحم (آندومتر ) در خارج از حفره رحم ظاهر می شود . بافت اندومتریوز در نقاطی غیرمعمول در قسمت پایینی حفره داخلی شکم بوجود می آید که این بافت های غیرطبیعی مشتمل بر غدد و استروما در خارج از حفره رحم می باشند . (ونزل و همکاران ،2003 ؛ هالیس و آریسی ،2004 )[1] حفره رحم با سلول های آندومتر پوشیده شده است که تحت تاثیر هورمون های زنانه هستند . سلول های مشابه آندومتر (اندومتریوز ) در مناطق خارج از رحم تحت تاثیر تغییرات هورمونی هستند و واکنش و پاسخ هایی مشابه سلول هایی که درون رحم یافت می شوند ، را به تحریکات می دهند . علائم اغلب با سیکل قاعدگی تشدید می شود . اندومتریوز به طور معمول در طول سال های باروری دیده می شود . این‌ بافت‌ ممكن‌ است‌ روی‌ سطح‌ تخمدان‌؛ پشت‌ رحم‌ و در حفره‌ لگنی‌؛ روی‌ دیواره‌ روده‌؛ سایر نواحی و اعضا به ترتیب برحسب میزان بروز عبارتند از: پری تنئوم، بن بست خلفی صفاق، رباطهای رحمی – خاجی، لوله های فالوپ، سطح رحم، سپتوم ركتوواژینال و در موارد نادر در اسكارهای سزارین و عمل جراحی، دیافراگم، ششها، مغز، بازو، ساق پا، پلور و ریه ومثانه و ندرتاً در نقاطی‌ دورتر به‌ وجود آید. (لیبوویک و همکاران ، 2001 )[2] آندومتریوز به‌ چهار مرحله‌ محدود، خفیف‌، متوسط‌، و شدید تقسیم‌ می‌شود كه‌ بیانگر محل‌ قرارگیری‌ و شدت‌ اختلال‌ هستند. این‌ اختلال‌ می‌تواند در هر سنی‌ از بلوغ‌ تا یائسگی‌ رخ‌ دهد اما در سنین‌ 30-20 سالگی‌ بیشتر دیده‌ می‌شود. شیوع کلی اندومتریوز به طور واضح شناخته نشده است و براساس عوامل و شرایط مختلف از جمله موقعیت جغرافیایی و نژاد متغیر می باشد. ( کیتاواکی و همکاران ، 2003 )[3] شیوع اندومتریوز در زنان نابارور و بارور به ترتیب حدود 30 – 10 درصد تخمین زده می شود. (دی هوگه و همکاران،2004 )[4] اندومتریوز یک یافته شایع در زنان نابارور است . از آنجا كه محل بروز بیماری بستگی به نحوه انتقال بافت اندومتر به محل دارد و در بیشتر موارد این انتقال بوسیله قاعدگی برگشتی صورت می گیرد . بنابراین این بافت معمولا محدود به حفره لگنی است . تخمدان شایع ترین محل بیماری اندومتریوز است و تقریبا در 50 % موارد هر دو تخمدان گرفتار هستند . علائم ممکن است بستگی به مکان اندومتریوز فعال داشته باشد. البته این حالت کلی ندارد و از نشانه های شایع درد لگن در تظاهرات مختلف است .

( بولتی و همکاران ، 2010 )[5] هیچ درمان قطعی و کاملی برای اندومتریوز وجود ندارد ، اما می توان آن را از راه های مختلفی از جمله داروهای ضد درد و درمان های هورمونی و جراحی درمان کرد .

• ) علائم و نشانه ها :

1-2-1 ) درد لگن :

علامت عمده بیماری اندومتریوز درد لگن عود کننده است . این درد ممکن است رنج های مختلفی از خفیف تا شدید داشته باشد که در هر دو طرف لگن ، کمر ، ناحیه مقعد و حتی پاها رخ می دهد . میزان دردی که یک خانم احساس می کند ارتباط کمی با میزان یا مرحله(1- 4 ) اندومتریوز دارد . برخی از زنان با درد کم یا بدون درد آزار دهنده با وجود داشتن اندومتریوز شدید یا اندومتریوز با زخم دیده شده اند ، در حالیکه در زنان دیگر ممکن است درد شدید داشته باشند ولی دارای چند ناحیه کوچک مبتلا به اندومتریوز باشند . ( استراتون و بروکلی ، 2011 )[6] علائم درد مرتبط با اندومتریوز ممکن است شامل موارد زیر باشد:

1. اختلالات قاعدگی : قاعدگی دردناک ، گاهی اوقات گرفتگی عضلات ناتوان کننده ، درد ممکن است در طول زمان بدتر شود ( درد پیش رونده )