عنوان صفحه
فصل اول: مقدمه
1-1 کلیات.. 2
فصل دوم: مروری بر پژوهشهای پیشین
2-1- توصیف جمینی‌ویروس‌ها و اهمیت آنها 6
٢-2- طبقه بندی تیره Geminiviridae. 7
2-3- ویژگی‌های جنس Curtovirus. 10
2-3-1- ساختار ژنوم، تعداد و نقش چارچوب‌های خوانش کرتوویروس‌ها 11
2-3-2- تنوع ژنتیکی موجود در بین گونه‌های جنس Curtovirus. 12
2-4- ویژگی‌های جنس Becurtovirus. 15
2-5- انتقال ویروس پیچیدگی بوته چغندرقند با حشره ناقل.. 17
2-6- انتقال ویروس پیچیدگی بوته چغندرقند به روش Agroinoculation. 18
2-7- سایر روشهای انتقال ویروس پیچیدگی بوته چغندرقند. 19
2-8-دامنه میزبانی ویروس‌های ایجاد کننده بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند. 20
2-9-علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند. 25
2-10-كنترل بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند. 27
2-11-مقاومت به ویروس پیچیدگی بوته چغندرقند. 29
فصل سوم: مواد و روشها
3-1 کشت و پرورش گیاهان مورد استفاده در این تحقیق.. 32
3-2- همسانه‌های عفونتزای مورد استفاده 33
عنوان صفحه
3-3- کشت باکتری حاوی سازه‌های دوپار ناقص ویروس‌ها 33
3-4- تهیه زادمایه باکتری حاوی همسانه عفونتزای BCTIV و BSCTV-IR برای مایه‌زنی و ایجاد آلودگی بوته‌های چغندرقند 33
3-5- استخراج دی.ان.ای از بافت گیاهی.. 34
3-5-1- استخراج DNA از بافت های گیاهی با استفاده از محلول CTAB.. 34
3-5-2 استخراج DNA از بافت های گیاهی با استفاده از کیت.. 35
3 – 6- آزمون زنجیره ای پلیمراز ((PCR.. 35
3-7- تهیه ژل و انجام الکتروفورز برای بررسی نتایج آزمون PCR.. 37
3-8- آزمون واکنش زنجیرهای پلیمراز در زمان واقعی ( RT- PCR , (Real-Time PCR.. 38
3-9- آنالیز دادههای آزمون Real-time PCR.. 40
3-10- کنترل مثبت و منفی در آزمون Real-Time PCR.. 40
3-11- روش تهیه نمونههای دیانای مورد استفاده در آزمون Real-Time PCR.. 41
3-12- تهیهی الگوهای مثبت استاندارد. 41
3-13- روش تهیهی آب تیمار شده با DEPC.. 42
3-14- روش استخراج دیانای پلاسمیدهای نوترکیب.. 42
3-15- طرح آزمایش ارزیابی مقاومت ارقام چغندرقند پس از مایه‌زنی با روش اگرواینوکولیشن.. 43
3-16 طرح آزمایش ارزیابی مقاومت سه رقم انتخابی چغندرقند در آلودگی انفرادی و مخلوط به BCTIV و BSCTV-IR 45
3-17- روشهای تجزیه آماری.. 46
3-17-1- تجزیه آماری دادههای مربوط به شدت علائم بیماری ارقام یازدهگانه چغندرقند مایه‌زنی شده با همسانه عفونت زای BCTIV 46
3-17-2- تجزیه آماری دادههای مربوط به وزن قسمتهای هوایی، ریشه و کل گیاه ارقام یازدهگانه چغندرقند مایه‌زنی شده با همسانه عفونت زای BCTIV.. 48
عنوان صفحه
3-17-3 تجزیه آماری دادههای مربوط به شدت علائم بیماری در آزمایش ارزیابی مقاومت سه رقم انتخابی چغندرقند مایه‌زنی شده با همسانه عفونتزای BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و مخلوط.. 48
3-17-4- تجزیه آماری دادههای مربوط به وزن قسمتهای هوایی، ریشه و وزن کل گیاه سه رقم انتخابی چغندرقند مایه‌زنی شده با همسانه‌های عفونت زای BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و مخلوط.. 50
فصل چهارم: نتایج
4-1 ردیابی ویروس پیچیدگی ایرانی بوته چغندرقند(BCTIV) در ارقام یازدهگانه چغندرقند پس از مایه‌زنی با همسانه عفونتزای این ویروس با استفاده از PCR.. 52
4–2 واکنش فنوتیپی ارقام چغندر قند پس از مایه زنی با سوسپانسیون باکتری حاوی همسانه عفونت زای BCTIV 53
4-3 بررسی آماری ارزیابی مقاومت ارقام چغندرقند پس از مایه‌زنی با همسانه عفونتزای BCTIV در چهار کشت متوالی 61
4-3-1 تجزیه و تحلیل دادههای مربوط به علائم بیماری در روزهای 21 و 35 بعد از زمان مایه‌زنی با همسانه عفونتزای BCTIV در چهار کشت متوالی.. 61
4-3-2 تجزیه و تحلیل آماری دادههای مربوط به وزن قسمتهای هوایی و وزن ریشه ارقام یازدهگانه چغندرقند پس از مایه‌زنی با همسانه عفونتزای BCTIV در چهار کشت متوالی.. 72
4-4 بررسی آماری ارزیابی مقاومت ارقام چغندرقند پس از مایه‌زنی با همسانه عفونتزای BCTIV و BSCTV-IR در آلودگی مخلوط-در سه رقم. 83
4-4-1 بررسی ارزیابی مقاومت سه رقم انتخابی چغندرقند بعد از مایه‌زنی با BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و مخلوط همزمان 83
4-4-2 تجزیه و تحلیل دادههای مربوط به شدت علائم بیماری پس از مایه‌زنی با همسانه‌های عفونتزای BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و مخلوط در چهار کشت متوالی.. 88
4-4-3 تجزیه و تحلیل دادههای مربوط به وزن قسمتهای هوایی و وزن ریشه در روز 35 بعد از زمان مایه زنی با همسانه‌های عفونتزای BCTIV و BSCTV-IR در چهار کشت متوالی.. 94
عنوان صفحه
4-5 بررسی برهمکنش دو ویروس BCTIV و BSCTV-IR در آلودگی مخلوط همزمان با استفاده از Real Time PCR.. 100
4-5-1 کارایی آغازگرها در تکثیر رقت‌های استانداردها به منظور سنجش اعتبار آزمون RT-PCR.. 101
4-5-2 مقایسه غلظت ویروس‌های مورد مطالعه در آلودگی‌های انفرادی و مخلوط در آزمون RT-PCR.. 103
فصل پنجم: بحث و نتیجهگیری
5-1 ارزیابی مقاومت ارقام مختلف چغندرقند نسبت به ویروس ایرانی پیچیدگی بوته چغندرقند (BCTIV) 108
5-2 بررسی برهمکنش ویروس پیچیدگی شدید بوته چغندر و ویروس ایرانی پیچیدگی بوته چغندر در آلودگی مخلوط همزمان بر روی سه رقم Brigita ، Dorothea و 7233. 114
منابع 117
چکیده و صفحهی عنوان به زبان انگلیسی
فهرست جدولها
عنوان صفحه
جدول 2-1 میزبان‌های طبیعی BCTV در ایران و مهمترین علایم موجود در آنها (آل یاسین و همکاران، 1374) 21
جدول 2-2 میزبان‌های ویروس عامل بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند ((Heydarnejad et al., 2007. 22
جدول 2-3 میزبان‌های طبیعی BSCTV-IR و BCTIRV گزارش شده از ایران (جهان بین، 1392) 24
جدول 3-1 آغازگرهای مورد استفاده برای تکثیر قطعهی 496 جفت بازی از ژنوم BSCTV-IR.. 36
جدول 3- 2 آغازگرهای مورد استفاده برای تکثیر قطعهی 682 جفت بازی از ژنوم BCTIV.. 36
جدول 3-3 نوع و مقدار مواد مورد استفاده در آزمون واکنش زنجیره ای پلی مراز 36
جدول 3- 4- سیكل دمایی آزمون PCR.. 37
جدول 3-5- نوع و مقدار مواد مورد استفاده در آزمون واكنش Real-Time PCR.. 38
جدول 3-6- آغازگرهای مورد استفاده برای تکثیر قطعهی 142 جفت بازی از ژن rRNA18s Beet در چغندرقند به عنوان کنترل داخلی گیاه چغندرقند جهت استفاده در آزمون RT- PCR.. 39
جدول 3-7 آغازگرهای مورد استفاده در آزمون RT-PCR برای تکثیر قطعهی 116 جفت بازی از ژنوم BSCTV-IR.. 39
جدول 3-8 آغازگرهای مورد استفاده در آزمون RT-PCR برای تکثیر قطعهی 116 جفت بازی از ژنوم BCTIV.. 39
جدول 3-9 سیکلهای دمایی آزمون RT-PCR.. 39
جدول 3-10 نمره دهی شدت علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند با استفاده از مقیاس ترتیبی در 5 درجه 44
جدول4-1 تعداد گیاهان (از جمع 15 گیاه در هر تیمار) نشان دهنده شدت‌های مختلف علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند مایه‌زنی شده با همسانه عفونتزایBCTIV، 21 و 35 روز بعد از زمان مایه‌زنی- کشت اول. 57
جدول4-2 تعداد گیاهان (از جمع 15 گیاه در هر تیمار) نشان دهنده شدت‌های مختلف علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند مایه‌زنی شده با همسانه عفونتزایBCTIV، 21 و 35 روز بعد مایه‌زنی- کشت دوم. 58
عنوان صفحه
جدول4-3 تعداد گیاهان(از جمع 15 گیاه در هر تیمار) نشان دهنده شدت‌های مختلف علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند مایه‌زنی شده با همسانه عفونتزایBCTIV، 21 و 35 روز بعد مایه‌زنی- کشت سوم. 59
جدول4-4 تعداد گیاهان (از جمع 15 گیاه در هر تیمار) نشان دهنده شدت‌های مختلف علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند مایه‌زنی شده با همسانه عفونتزای BCTIV، 21 و 35 روز بعد مایه‌زنی- کشت چهارم. 60
جدول-4-5 تجزیه واریانس شاخص بیماری ارقام چعندرقند در 4 کشت متوالی.. 62
جدول 4-6 مقایسه میانگین شدت علائم بیماری ارقام یازد‌گانه چغندرقند پس از مایه‌زنی با همسانه عفونتزای BCTIV -کشت اول 63
جدول 4-7 مقایسه میانگین شدت علائم بیماری -کشت دوم. 66
جدول 4-8 مقایسه میانگین شدت علائم بیماری –کشت سوم. 68
جدول 4-9 مقایسه میانگین شدت علائم بیماری- کشت چهارم. 70
جدول-4-10 تجزیه واریانس دادههای وزن قسمتهای هوایی و ریشه. 73
جدول-4-11 مقایسه میانگین دادههای وزن قسمتهای هوایی، ریشه و وزن کل ارقام یازدهگانه چغندرقند پس از مایه‌زنی با همسانه عفونت زای BCTIV- کشت اول. 74
جدول-4-12 مقایسه میانگین دادههای وزن قسمتهای هوایی، ریشه و وزن کل ارقام یازدهگانه چغندرقند پس از مایه‌زنی با همسانه عفونت زای BCTIV- کشت دوم.
یک مطلب دیگر :
۲۰ نمونه از سایت های وردپرسی مشهور
77
جدول-4-13 مقایسه میانگین دادههای وزن قسمتهای هوایی، ریشه و وزن کل ارقام یازدهگانه چغندرقند پس از مایه‌زنی با همسانه عفونت زای BCTIV -کشت سوم. 79
جدول-4-14 مقایسه میانگین دادههای وزن قسمتهای هوایی، ریشه و وزن کل ارقام یازدهگانه چغندرقند پس از مایه‌زنی با همسانه عفونت زای BCTIV -کشت چهارم. 81
جدول4-15 تعداد گیاهان (از جمع 6 گیاه در هر تیمار) نشان دهنده شدت‌های مختلف علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند در کشت مخلوط و مایه‌زنی همزمان، 21 و 35 روز بعد از زمان مایه‌زنی- کشت اول. 84
جدول4-16 تعداد گیاهان نشان (از جمع 6 گیاه در هر تیمار) دهنده شدت‌های مختلف علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند در کشت مخلوط همزمان، 21 و 35 روز بعد مایه‌زنی- کشت دوم. 85
عنوان صفحه
جدول4-17 تعداد گیاهان نشان (از جمع 6 گیاه در هر تیمار) دهنده شدت‌های مختلف علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند در کشت مخلوط همزمان، 21 و 35 روز بعد مایه‌زنی- کشت سوم. 86
جدول4-18 تعداد گیاهان نشان (از جمع 6 گیاه در هر تیمار) دهنده شدت‌های مختلف علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند در کشت مخلوط همزمان، 21 و 35 روز بعد مایه‌زنی- کشت چهارم. 87
جدول-4-19 تجزیه واریانس دادههای وزن قسمت هوایی و ریشه در آلودگی انفرادی و مخلوط با BCTIV و BSCTV 89
جدول 4-20 آنالیز دادههای مربوط به غلظت ویروس‌هایBSCTV-IR و BCTIVدر گیاهان مایه‌زنی شده 21 روز بعد از زمان مایه‌زنی در آلودگی انفرادی و مخلوط همزمان. 104
جدول 4-21 آنالیز دادههای مربوط به غلظت ویروس‌هایBSCTV-IR و BCTIVدر گیاهان مایه‌زنی شده 35 روز بعد از زمان مایه‌زنی در آلودگی انفرادی و مخلوط همزمان. 105
فهرست شکلها
عنوان صفحه
شکل 2-1 وجود نقاط برجسته در روی رگبرگ‌ها و چروکیدگی برگ چغندرقند در اثر آلودگی به ویروس کرلی تاپ ( فتاحی 1391)………………………………………………………………………………………………………… 26
شکل 3-1 سری رقت‌های تهیه شده از محصول PCR دی ان ای پلاسمید استخراج شده از آگروباکتریوم………………………………………………………………………………………………………………………………. 42
شکل 4-1 نقوش الکتروفورزی محصولات PCR تکثیر شده از دی.ان.ای استخراج شده از گیاهان ارقام کشت شده (کشت اول)…………………………………………………………………………………………………………..53
شکل4-2 شدت علائم بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند………………………………………………………………………….. 56
شکل 4-4 دندروگرام رابطهی ارقام یازدهگانه چغندر قند بر پایه نوع علائم ایجاد شده درآنها پس از 35 روز از مایه‌زنی با سوسپانسیون باکتری حاوی همسانه عفونتزای BCTIV- کشت اول. محور افقی فاصله گروه‌ها را براساس میزان مشابهت آنها نشان می‌دهد……………………………………………………… 64
شکل 4-6 دندروگرام رابطهی ارقام یازدهگانه چغندر قند بر پایه نوع علائم ایجاد شده درآنها پس از 35 روز از مایه‌زنی با سوسپانسیون باکتری حاوی همسانه عفونتزای BCTIV- کشت دوم محور افقی فاصله گروه‌ها را براساس میزان مشابهت آنها را نشان می‌دهد…………………………………………………67
شکل 4-8 دندروگرام رابطهی ارقام یازدهگانه چغندر قند بر پایه نوع علائم ایجاد شده درآنها پس از 35 روز از مایه‌زنی با سوسپانسیون باکتری حاوی همسانه عفونتزای BCTIV- کشت سوم- محور افقی فاصله گروه‌ها را براساس میزان مشابهت آنها را نشان می‌دهد…………………………………………………. 69
شکل 4-10 دندروگرام رابطهی ارقام یازدهگانه چغندر قند بر پایه نوع علائم ایجاد شده درآنها پس از 35 روز از مایه‌زنی با سوسپانسیون باکتری حاوی همسانه عفونتزای BCTIV- – محور افقی فاصله گروه‌ها را براساس میزان مشابهت آنها را نشان می‌دهد.کشت چهارم………………………………………..71
شکل 4-11 مقایسه میانگین وزن قسمت هوایی، وزن ریشه وزن کل گیاه در ارقام یازدهگانه- روز 35 بعد مایه‌زنی – کشت اول- ستون‌های که دارای حداقل یک حرف مشترک باشند از نظر وزن با یکدیگر اختلاف معنی‌دار ندارند…………………………………………………………………………………………………………..75
عنوان صفحه
شکل 4-12 مقایسه میانگین وزن قسمت هوای، وزن ریشه و اثر متقابل بین آنها در ارقام یازدهگانه- روز 35 بعد مایه‌زنی – کشت دوم – ستون‌های که دارای حداقل یک حرف مشترک باشند از نظر وزن با یکدیگر اختلاف معنی‌دار ندارند. …………………………………………………………………………………………….78
شکل 4-13 مقایسه میانگین وزن برگ، وزن ریشه و اثر متقابل بین آنها در ارقام یازدهگانه -روز 35 بعد مایه‌زنی- کشت سوم- ستون‌های که دارای حداقل یک حرف مشترک باشند از نظر وزن با یکدیگر اختلاف معنی‌دار ندارند………………………………………………………………………………………………………….. 80
شکل 4-14 مقایسه میانگین وزن برگ، وزن ریشه و اثر متقابل بین آنها در ارقام یازدهگانه – روز 35 بعد مایه زنی– کشت چهارم- ستون‌های که دارای حداقل یک حرف مشترک باشند از نظر وزن با یکدیگر اختلاف معنی‌دار ندارند……………………………………………………………………………………………… 82
شکل4-15 نمودار مقایسه میانگین شاخص شدت علائم بیماری در سه رقم مایه‌زنی شده با BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و آلودگی مخلوط همزمان- روز 21 بعد از زمان مایه‌زنی- کشت اول90
شکل4-16 نمودار مقایسه میانگین شاخص شدت علائم بیماری در سه رقم مایه‌زنی شده با BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و آلودگی مخلوط همزمان– روز 35 بعد از زمان مایه‌زنی- کشت اول………………………………………………………………………………………………………………………………………………..90
شکل4-17نمودار مقایسه میانگین شاخص شدت علائم بیماری در سه رقم مایه‌زنی شده با BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و آلودگی مخلوط همزمان- روز 21 بعد از زمان مایه‌زنی- کشت دوم………………………………………………………………………………………………………………………………………… 91
شکل4-18 نمودار مقایسه میانگین شاخص شدت علائم بیماری در سه رقم مایه‌زنی شده با BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و آلودگی مخلوط همزمان-روز 35 بعد از زمان مایه‌زنی- کشت دوم……………………………………………………………………………………………………………………………………………….91
شکل4-19 نمودار مقایسه میانگین شاخص شدت علائم بیماری در سه رقم مایه‌زنی شده با BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و آلودگی مخلوط همزمان-روز 21 بعد از زمان مایه‌زنی- کشت سوم……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 92
شکل4-20 نمودار مقایسه میانگین شاخص شدت علائم بیماری در سه رقم مایه‌زنی شده با BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و آلودگی مخلوط همزمان-روز 35 بعد از زمان مایه‌زنی- کشت سوم…………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 92
عنوان صفحه
شکل4-21 نمودار مقایسه میانگین شاخص شدت علائم بیماری در سه رقم مایه‌زنی شده با BCTIV و BSCTV-IR بطور انفرادی و آلودگی مخلوط همزمان-روز 21 بعد از زمان مایه‌زنی- کشت چهارم…………………………………………………………………………………………………………………………………………. 93
شکل4-22 نمودار مقایسه میانگین شاخص شدت علائم بیماری در سه رقم مایه‌زنی شده با BCTIV وBSCTV-IR بطور انفرادی و آلودگی مخلوط همزمان-روز 35 بعد از زمان مایه‌زنی- کشت چهارم…………………………………………………………………………………………………………………………………………. 93
شکل 4-23نمودار مقایسه میانگین دادههای وزن تر قسمتهای هوایی سه رقم مایه‌زنی شده در آلودگی انفرادی و مخلوط همزمان BCTIV و BSCTV-IR روز 35 بعد از زمان مایه‌زنی –کشت اول. 95
شکل 4-24 نمودار مقایسه میانگین دادههای وزن تر ریشه سه رقم مایه‌زنی شده در آلودگی انفرادی و مخلوط همزمان BCTIV و BSCTV-IR روز 35 بعد از زمان مایه‌زنی –کشت اول………………..96
شکل 4-25 نمودار مقایسه میانگین دادههای وزن تر قسمت هوایی سه رقم مایه‌زنی شده در آلودگی انفرادی و مخلوط همزمان BCTIV و BSCTV-IR روز 35 بعد از زمان مایه‌زنی- کشت دوم……………..97
