2-2-8-2 تاریخچه کشت بافت گیاهی …………………………………………………………………………………………………………………………………15

3-2-8-2 تاریخچه کشت بافت نخود شیرین ……………………………………………………………………………………………………………………….16

3-8-2 مراحل ریز افزائی ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….16

1-3-8-2 گندزدائی سطحی بذر …………………………………………………………………………………………………………………………………………..16

2-3-8-2 قارچ کش ها و آنتی بیوتیک ها ……………………………………………………………………………………………………………………………17

3-3-8-2 الکل اتیلیک (اتانول) …………………………………………………………………………………………………………………………………………….17

4-3-8-2 ترکیبات زداینده ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………18

5-3-8-2 محیط کشت ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….18

6-3-8-2 آب …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………19

7-3-8-2 نمک های معدنی، عناصر پر مصرف و کم مصرف ………………………………………………………………………………………………..20

8-3-8-2 کربوهیدرات …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..20

9-3-8-2 ویتامین ها …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….20

10-3-8-2 تنظیم کننده های رشد گیاهی ………………………………………………………………………………………………………………………….21

1-10-3-8-2 اثرات اکسین ها بر کشت بافت ……………………………………………………………………………………………………………………..21

2-10-3-8-2 اثرات سیتوکنین ها بر کشت بافت ………………………………………………………………………………………………………………..22

3-10-3-8-2 اثرات اسید جیبرلیک بر کشت بافت ……………………………………………………………………………………………………………..22

4-8-2 آگار …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….23

5-8-2 کشت ریزنمونه …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..23

1-5-8-2 پرآوری شاخساره …………………………………………………………………………………………………………………………………………………..23

2-5-8-2 اندام زایی مستقیم ………………………………………………………………………………………………………………………………………………..24

3-5-8-2 تشکیل کالوس ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………25

4-5-8-2 باززائی از کالوس ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………27

5-5-8-2 ریشه زایی ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..28

6-5-8-2 سازگاری ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..30

فصل سوم: مواد و روش ها

1-3 زمان و محل انجام آزمایش ……………………………………………………………………………………………………………………………………………33

2-3 تجهیزات آزمایشگاهی ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………33

1-2-3 آزمایشگاه تهیه ترکیبات مختلف، محلول های پایه و محیط های کشت ………………………………………………………………..33

2-2-3 اتاق انتقال ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….35

3-2-3 اتاق رشد …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….35

3-3 تهیه مواد گیاهی …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….36

4-3 ریزنمونه های مورد استفاده …………………………………………………………………………………………………………………………………………..36

5-3 تهیه محیط کشت ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….36

1-5-3 تهیه محلول های پایه و نگهداری آنها ………………………………………………………………………………………………………………………36

2-5-3 تهیه محلول های پایه تنظیم کننده های رشد …………………………………………………………………………………………………………37

3-5-3 نحوه آماده کردن محیط کشت …………………………………………………………………………………………………………………………………37

6-3 گندزدایی و سترون سازی وسایل ………………………………………………………………………………………………………………………………….40

7-3 آزمایش اول: گندزدایی سطحی بذر ………………………………………………………………………………………………………………………………40

8-3 آزمایش دوم: جوانه زنی بذر در محیط کشت ……………………………………………………………………………………………………………….41

9-3 زیر کشت کردن ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..41

10-3 آزمایش سوم: پرآوری شاخساره از ریزنمونه جوانه های جانبی و انتهایی ………………………………………………………………….42

11-3 آزمایش چهارم: القاء تولید کالوس ………………………………………………………………………………………………………………………………42

12-3 آزمایش پنجم: آزمایش اندام زائی از کالوس ……………………………………………………………………………………………………………….44

13-3 آزمایش ششم: اندام زائی مستقیم ………………………………………………………………………………………………………………………………45

14-3 آزمایش هفتم: ریشه زایی شاخساره های تشکیل شده از کشت غیرمستقیم و کشت مستقیم ………………………………..45

15-3 آزمایش هشتم: سازگاری و انتقال به خاک …………………………………………………………………………………………………………………46

1-15-3 تهیه بستر کشت ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………..46

2-15-3 سازگاری ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….46

3-15-3 انتقال به گلخانه ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………47

16-3 تجزیه و تحلیل آماری…………………………………………………………………………………………………………………………………………………..47

فصل چهارم: نتایج

1-4 اثر نوع تیمار گندزدایی بر درصد آلودگی بذرهای کشت شده در شرایط کشت درون شیشه ای محیط کشت…………..49

1-1-4 درصد آلودگی …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….50

2-4 بررسی اثر نوع محیط کشت و شرایط روشنایی بر درصد جوانه زنی بذرهای نخود شیرین………………………………………….50

1-2-4 اثر محیط کشت بر درصد جوانه زنی بذرهای نخود شیرین ……………………………………………………………………………………..51

2-2-4 اثر روشنایی بر درصد جوانه زنی بذرهای نخود شیرین ……………………………………………………………………………………………52

3-2-4 برهمکنش اثر محیط کشت و شرایط روشنایی بر درصد جوانه زنی بذرهای نخود شیرین …………………………………….52

3-4 بررسی اثر نوع محیط کشت و نوع ریزنمونه بر پرآوری شاخساره …………………………………………………………………………………53

1-3-4 تعداد شاخساره ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….54

2-3-4 طول بلندترین شاخساره ……………………………………………………………………………………………………………………………………………56

4-4 تشکیل کالوس ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….58

1-4-4 اثر محیط‏های کشت MS و B5 بر وزن کالوس ……………………………………………………………………………………………………..59

2-4-4 اثر ریزنمونه بر وزن کالوس ……………………………………………………………………………………………………………………………………….60

3-4-4 اثر نوع هورمون های بکار رفته بر وزن کالوس ………………………………………………………………………………………………………….60

4-4-4 اثر برهمکنش نوع محیط‏های کشت MS و B5 و ریزنمونه بر وزن کالوس …………………………………………………………..61

5-4-4 اثر برهمکنش محیط‏های کشت MS و B5 و هورمون بر وزن کالوس …………………………………………………………………..62

6-4-4 اثر برهمکنش نوع ریزنمونه و هورمون بر وزن کالوس ………………………………………………………………………………………………63

7-4-4 اثر برهمکنش محیط‏های کشت MS و B5، ریزنمونه و هورمون بر وزن کالوس …………………………………………………..63

5-4 اندام زایی از کالوس ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..66

1-5-4 تعداد شاخساره …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..67

1-1-5-4 اثر ریزنمونه بر تعداد شاخساره ……………………………………………………………………………………………………………………………..67

2-1-5-4 اثر محیط کشت کالوس زا بر تعداد شاخساره ………………………………………………………………………………………………………67

3-1-5-4 اثر محیط کشت اندام زا بر تعداد شاخساره ………………………………………………………………………………………………………….68

4-1-5-4 اثر برهمکنش ریزنمونه و محیط کشت کالوس زا بر تعداد شاخساره ………………………………………………………………….69

5-1-5-4 اثر برهمکنش ریزنمونه و محیط کشت اندام زا بر تعداد شاخساره ……………………………………………………………………. 70

 

6-1-5-4 اثر برهمکنش محیط کشت کالوس زا و محیط کشت اندام زا بر تعداد شاخساره ………………………………………………71

7-1-5-4 اثر برهمکنش نوع ریزنمونه، محیط کشت کالوس زا و محیط کشت اندام زا بر تعداد شاخساره…………………………72

2-5-4 طول شاخساره …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..75

1-2-5-4 اثر ریزنمونه بر طول شاخساره ………………………………………………………………………………………………………………………………75

2-2-5-4 اثر محیط کشت کالوس زا بر طول شاخساره ……………………………………………………………………………………………………….75

3-2-5-4 اثر محیط کشت اندام زا بر طول شاخساره …………………………………………………………………………………………………………..76

4-2-5-4 اثر برهمکنش ریزنمونه و محیط کشت کالوس زا بر طول شاخساره …………………………………………………………………..77

5-2-5-4 اثر برهمکنش ریزنمونه و محیط کشت اندام زایی بر طول شاخساره ………………………………………………………………….77

6-2-5-4 اثر برهمکنش محیط کشت کالوس زا و محیط کشت اندام زا بر طول شاخساره ……………………………………………….78

7-2-5-4 اثر برهمکنش ریزنمونه، محیط کشت کالوس زا و محیط کشت اندام زا بر طول شاخساره ……………………………….79

6-4 اندام زایی مستقیم ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….82

1-6-4 تعداد شاخساره …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..82

1-1-6-4 اثر ریزنمونه بر تعداد شاخساره ……………………………………………………………………………………………………………………………..82

2-1-6-4 اثر محیط کشت اندام زا بر تعداد شاخساره ………………………………………………………………………………………………………….83

3-1-6-4 اثر برهمکنش ریزنمونه و محیط کشت اندام زا بر تعداد شاخساره ………………………………………………………………………84

2-6-4 طول شاخساره ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………84

1-2-6-4 اثر ریزنمونه بر طول شاخساره ………………………………………………………………………………………………………………………………84

2-2-6-4 اثر محیط کشت اندام زا بر طول شاخساره …………………………………………………………………………………………………………..85

3-2-6-4 اثر برهمکنش ریزنمونه و محیط کشت اندام زا بر طول شاخساره ……………………………………………………………………….86

7-4 ریشه زایی ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………88

1-7-4 تعداد ریشه …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………88

1-1-7-4 اثر غلظت محیط کشت بر تعداد ریشه …………………………………………………………………………………………………………………88

2-1-7-4 اثر غلظت هورمون بر تعداد ریشه …………………………………………………………………………………………………………………………89

3-1-7-4 اثر برهمکنش غلظت محیط کشت و غلظت هورمون بر تعداد ریشه …………………………………………………………………..90

2-7-4 طول ریشه ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….90

1-2-7-4 اثر غلظت محیط کشت بر طول ریشه ………………………………………………………………………………………………………………….90

2-2-7-4 اثر غلظت هورمون بر طول ریشه ………………………………………………………………………………………………………………………….91

3-2-7-4 اثر برهمکنش غلظت محیط کشت پایه و غلظت هورمون بر طول ریشه …………………………………………………………….92

یک مطلب دیگر :

8-4 سازگاری …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………94

1-8-4 اثر بستر کشت سازگاری بر درصد زنده مانی ……………………………………………………………………………………………………………94

2-8-4 اثر بستر کشت سازگاری بر طول شاخساره ………………………………………………………………………………………………………………95

3-8-4 اثر بستر کشت سازگاری بر طول ریشه …………………………………………………………………………………………………………………….97

فصل پنجم: بحث، نتیجه گیری و پیشنهادات

1-5 بررسی گندزدایی بذرهای کشت شده در شرایط درون شیشه ای ……………………………………………………………………………..100

2-5 جوانه زنی بذر کشت شده نخود شیرین در محیط کشت …………………………………………………………………………………………..102

3-5 پرآوری شاخساره …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………102

4-5 تولید کالوس ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..104

5-5 اندام زایی غیرمستقیم (باززایی از کالوس) ………………………………………………………………………………………………………………….106

6-5 اندام زایی مستقیم ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….108

7-5 ریشه زایی شاخساره های تولید شده ………………………………………………………………………………………………………………………….109

8-5 سازگاری و انتقال …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………111

9-5 نتیجه گیری کلی …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………113

10-5 پیشنهادات …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………114

فهرست منابع ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….115

 

 

 

 

 

((فهرست جداول و شکل ها))

عنوان                                                                                                                                      صفحه

جدول 1-3 اجزاء تشکیل دهنده محیط کشت موراشیگ و اسکوگ (MS) ………………………………………………………………………..38

جدول 2-3 اجزاء تشکیل دهنده محیط کشت گامبورگ، 1968 (B5) ………………………………………………………………………………39

جدول 3-3 تیمارهای گندزدایی جهت ضدعفونی بذر ………………………………………………………………………………………………………….40

جدول 4-3 تیمارهای جوانه زنی بذر نخود شیرین در شرایط درون شیشه ای ……………………………………………………………………41

جدول 5-3 تیمارهای مختلف آزمایش پرآوری ……………………………………………………………………………………………………………………..42

جدول 6-3 تیمارهای مختلف آزمایش تولید کالوس در محیط کشت MS ………………………………………………………………………..43

جدول 7-3 تیمارهای مختلف آزمایش تولید کالوس در محیط کشت B5 …………………………………………………………………………43

جدول 8-3 تیمارهای مختلف باززایی غیرمستقیم ………………………………………………………………………………………………………………..44

جدول 9-3 تیمارهای مختلف باززایی مستقیم ……………………………………………………………………………………………………………………..45

جدول 10-3 تیمارهای مختلف ریشه زایی در محیط کشت MS ……………………………………………………………………………………….46

جدول 11-3 تیمارهای مختلف ریشه زایی در محیط کشت MSنیم قدرت ……………………………………………………………………..46

جدول 1-4 تجزیه واریانس اثرات تیمارهای گندزدایی بر درصد آلودگی بذرهای نخود شیرین ………………………………………….49

جدول 2-4 تجزیه واریانس درصد جوانه زنی بذرهای نخود شیرین تحت تاثیر محیط کشت و شرایط روشنایی ………………51

جدول 3-4 تجزیه واریانس برخی صفات اندازه گیری شده تحت تاثیر نوع محیط کشت پرآوری شاخساره و نوع ریزنمونه54

جدول 4-4 تجزیه واریانس شاخص وزن کالوس در آزمایش کالوس زایی …………………………………………………………………………..59

جدول 5-4 اثر برهمکنش نوع محیط کشت پایه، ریزنمونه و هورمون بر وزن کالوس …………………………………………………………64

جدول 6-4 تجزیه واریانس خصوصیات شاخساره نخود شیرین در اندام زایی غیرمستقیم ………………………………………………….66

جدول 7-4 اثر برهمکنش نوع ریزنمونه، محیط کشت کالوس زا و محیط کشت باززایی بر تعداد شاخساره ……………………..73

جدول 8-4 اثر برهمکنش ریزنمونه، محیط کشت کالوس زا و محیط کشت اندام زا بر طول شاخساره ……………………………..80

جدول 9-4 تجزیه واریانس شاخص های تعداد شاخساره و طول شاخساره تحت تاثیر تیمارهای مختلف اندام زایی مستقیم…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….82

جدول 10-4 تجزیه واریانس تعداد ریشه و طول ریشه در آزمایش ریشه زایی از شاخساره ……………………………………………….88

جدول 11-4 تجزیه واریانس درصد زنده مانی، طول شاخساره و طول ریشه در آزمایش سازگاری ……………………………………94