عنوان | صفحه | |
چکیده | 1 | |
مقدمه | 2 | |
فصل اول: مروری بر تحقیقات گذشته | ||
1- گیاهشناسی سیب زمینی | 4 | |
1-1) برگ | 4 | |
1-2) ساقه | 4 | |
1-3) غده | 5 | |
1-4) جوانه | 5 | |
1-5) ریشه | 5 | |
1-6) گل | 5 | |
2- ارقام سیب زمینی | 5 | |
2-1) رقمهاى خیلى زودرس و زودرس | 5 | |
2-2) رقمهاى متوسط رس یا میانرس | 6 | |
2-3) رقمهاى دیررس | 6 | |
3- تاریخچه | 7 | |
4- مواد موجود در سیب زمینی | 8 | |
5- مراحل کشت سیب زمینی | 8 | |
5-1) آماده كردن زمین برای كاشت سیبزمینی | 8 | |
5-2) آمادهکردن غدهها براى کاشت سیبزمینی | 9 | |
5-3) کاشتن غدهها | 10 | |
5-4) آبیاری سیب زمینی | 11 | |
5-5) كوددهی سیبزمینی | 11 | |
5 -6) وجین كردن و خاك دادن سیبزمینی | 12 | |
5-7) برداشت | 13 | |
6- مراحل پس از برداشت و فرآوری سیب زمینی | 14 | |
7- اهمیت اقتصادی سیبزمینی | 15 | |
8- ویروسهای بیماریزای سیبزمینی | 17 | |
9- ویروس ایكس سیبزمینی Potato virus X | 20 | |
9-1) آرایهبندی | 20 | |
9-2) علائم | 21 | |
9-3) دامنه میزبانی طبیعی ویروس ایكس سیبزمینی | 22 | |
9-4) گونه های میزبانی بكار رفته جهت تشخیص PVX | 23 | |
9-5) انتقال و انتشار ویروس | 23 | |
9-6) پراکنش جغرافیایی | 24 | |
9-7) خصوصیات ژنوم | 24 | |
9-8) خصوصیات پیكره ویروس | 26 | |
9-9) تکثیر ویروس ایکس سیبزمینی در گیاه | 27 | |
9-10) تنوع ژنتیكی ویروس ایكس سیبزمینی | 28 | |
10- روشهای ردیابی ویروس ایكس سیبزمینی | 30 | |
10-1) سرولوژی | 30 | |
10-2) بررسیهای مولكولی واکنش زنجیرهای پلیمراز Polymerase Chain Reaction (PCR) | 32 | |
11- مطالعات انجام شده در ایران | 37 | |
12- هدف از این تحقیق | 40 | |
فصل دوم:مواد و رو شها | ||
1- جمع آوری نمونه از مزارع سیبزمینی | 42 | |
2- آزمون الایزا Enzyme-Linked Immunosorbent Assay- ELISA)) | 42 | |
2-1) تهیه بافرها | 42 | |
2-1-1) بافرفسفات پتاسیم(PH, 7.4), (phosphate buffered saline-PBS) | 43 | |
2-1-2) بافر پوششی کربنات سدیم(PH, 9.6) , (Coating buffer) | 43 | |
2-1-3) بافر شستشو (PH,7.4),(Washing buffer) | 43 | |
2-1-4) بافر عصاره گیری (PH,7.4),(Extraction buffer) | 43 | |
2-1-5) بافر ترکیب پادتن-آنزیم (PH,7.4),(Conjugate buffer) | 43 | |
2-1-6) بافر زمینه (سوبسترا)(PH, 9.8),(Substrate buffer) | 44 | |
3- بررسیهای گلخانهای | 45 | |
4- بررسی انتقال | 46 | |
4-1) بررسی انتقال با سس | 46 | |
4-2) انتقال با تماس | 46 | |
5- بررسی خصوصیات مولكولی | 46 | |
5-1) استخراج آر.ان.ای (RNA Extraction) | 46 | |
5-2) واکنش زنجیرهای پلیمراز به روش رونوشت برداری برگردان (RT-PCR) | 48 | |
5-2-1) مرحله رونوشت برداری برگردان (Reverse transcriptase) | 48 | |
5-2-2) مرحله واکنش زنجیره ای پی. سی. آر | 48 | |
5-3) مشاهده محصول واكنش | 49 | |
5-4) خالص سازی قطعات تکثیر شده | 49 | |
5-4-1) جدا کردن قطعه ژل حاوی DNA تکثیر شده | 49 | |
5-4-2) حل کردن قطعه ژل و آزاد شده قطعه DNA | 49 | |
5-4-3)رسوب دادن DNA | 50 | |
5-4-4)شستشوی رسوب با بافر شستشو | 50 | |
5-4-5) حل شدن DNA در آب | 50 | |
5-6) آنالیز تبارازیی | 51 | |
6- خالص سازی ویروس PVX | 53 | |
7- اسپکتروفتومتری و تعیین غلظت ویروس جدا شده در آموده های(پرپارسیون) خالص شده | 55 | |
فصل سوم:نتیجه گیری | ||
1- بررسی علائم آلودگیهای موجود روی سیب زمینی | 56 | |
1-1) علائم آلودگی روی سیب زمینی | 56 | |
1-2) نشانههای آلودگی روی گوجه فرنگی | 57 | |
2- آزمون بیولوژیکی (واکنش گیاهان محک در مقابل عصاره حاوی ویروس ایکس) | 58 | |
2-1) گل تکمهایی Gomphrena globosa L. | 58 | |
2-2) داتوره Datura stramonium | 59 | |
2-3) سلمکChenopodium amaranticolor | 59 |
2-4) توتون Nicotiana glutinosa L | 60 |
2-5) توتون Nicotiana tabacum. cv. White Burley | 60 |
2-6) توتون Nicotiana tabacum. cv. Samsun | 61 |
2-7) گوجه فرنگی Lycopersicum esculentum Mill | 61 |
2-8) لوبیا Phaseolus vulgaris L.cv. Bountiful | 61 |
2-9) باقلا. Vicia faba | 61 |
2-10) ماش. Vicia sativa L. | 62 |
2-11) دامنه میزبانی و علائم | 62 |
3- درجه حرارت غیر فعال شدن (TIP) | 63 |
4- آخرین حد رقت (DEP) | 63 |
5- پایداری ویروس در شرایط آزمایشگاه (LIV) | 63 |
6- مطالعه روش های انتقال | 63 |
6-1) انتقال با سس | 63 |
6-2) انتقال با تماس | 63 |
7- خالص سازی | 63 |
7-1) روشShepard, 1972 | 63 |
7-2) روشFribourg,1975 | 64 |
7-3) روشMoreira, 1980 | 65 |
8- تعیین پراکنش ویروس بر اساس آزمون الایزاELISA | 65 |
9- بررسی خصوصیات مولكولی | 72 |
9-1) نتایج حاصل از استخراج آر.ان.ای كل گیاه (RNA Extraction) | 72 |
9-2) نتایج واکنش رونوشت برداری برگردان زنجیرهای پلیمراز (RT-PCR) |
73 |
10) آنالیز تبازایی | 74 |
یک مطلب دیگر :
[اینفوگرافی]: ۱۰ ستون اصلی و پایهای کارآفرینی
فصل چهارم:بحث، نتیجه گیری و پیشنهادات | 76 |
فهرست منابع فارسی | 84 |
فهرست منابع انگلیسی | 85 |
چکیده انگلیسی | 96 |
فهرست جداول | ||
عنوان | صفحه | |
جدول1-1 اسامی ویروس های سیب زمینی |
18 |
|
جدول 1-2 مقایسه بین ELISA, PCR, IC-PCR, RT-PCR-ELISA | 35 | |
جدول1-3 توالی آغازگرهای استفاده شده برای سنتز cDNA جهت ردیابی ویروس ایكس سیبزمینی | 37 | |
جدول2-1 منطقه و تعداد نمونه های جمع آوری شده از مزارع سیب زمینی در همدان | 42 | |
جدول2-2 گیاهان میزبانی که برای مایه زنی ویروس ایکس سیب زمینی استفاده شد | 45 | |
جدول2-3 آغازگرهای استفاده شده در آزمون RT-PCR | 49 | |
جدول2-4 لیست توالیهای کامل پروتئین پوششی PVX موجود در بانك ژن كه برای مقایسه با جدایههای ایرانی مورد استفاده قرار گرفتهاند | 52 | |
جدول3-1درصد نمونه های علائم دار جمع آوری شده از مزارع همدان | 57 | |
جدول3-2 علائم ویروس ایکس بروی گیاهان محک | 62 | |
جدول 3-3 درصد آلودگی به چهار ویروس PVX، PVY، PVS و PLRV در مناطق بهار، رزن و کبودرآهنگ | 65 | |
جدول3-4 درصد آلودگی همزمان در مزارع استان همدان | 66 |
[شنبه 1399-08-10] [ 12:23:00 ب.ظ ]
|