پایان نامه

 

فصل اول: مقدمه 1
1-1-مقدمه 2
1-2-انجماد 2
1-2-1-تاریخچه ی انجماد 3
1-2-2-تکنیک های مختلف انجمادی 3
1-2-2-1-انجماد آهسته 4
1-2-2-2-انجماد شیشه ای 5
1-2-3-محلول های انجمادی 5
1-2-3-1-ضدیخ ها 5
1-2-3-2-سرم 7
1-2-4-تاثیرات انجماد بر بافت بیضه 7
3- 1-3-پیوند 9
4- 1-4-کشت 10
5- 1-5-تغییرات ملکولی متاثر از انجماد 11
1-5-1-آپوپتوزیس 12
1-5-1-1-مسیر خارجی آپوپتوز و ژن های دخیل در آن 13
1-5-1-2-مسیرداخلی آپوپتوز و ژنهای دخیل در آن 14
1-5-1-3-P53 16
1-5-1-4-کاسپاز 3 17
1-6-هدف 18
1-7-پرسش پژوهشی 18
1-8-فرضیات 18
فصل دوم : مواد و روش ها 19
2-1-تهیه ی بافت بیضه و گروه های مورد مطالعه 20
2-2-انجماد شیشه ای بافت بیضه 21
2-2-1-روش تهیه محیط پایه 21
2-2-2-روش تهیه محلول های انجماد شیشه ای 21
2-2-2-1-روش آماده سازی محلول انجمادی I 21
2-2-2-2-روش آماده سازی محلول انجمادی II 22
2-2-3-مراحل انجماد شیشه ای 22
2-2-3-1-روش انجمادی I 22
2-2-3-2-روش انجمادی II 23
2-2-4-ذوب بافت بیضه 23
2-2-4-1-روش تهیه محلول های ذوب 23
2-2-4-2-مراحل ذوب 23
2-5-مطالعات میکروسکوپی و بافت شناسی بافت بیضه 24
2-6-بررسی آپوپتوز و بقا سلولی 26
2-6-1-هضم مکانیکی و آنزیمی بافت بیضه 26
2-6-1-1-هضم مکانیکی 27
2-6-1-2-هضم آنزیمی 27
2-6-1-3-خنثی سازی اثر آنزیم و بررسی بقا با استفاده از رنگ PI 27
2-6-2-ارزیابی بقای سلولی به روش فلوسایتومتری 28
2-6-3-بررسی آپوپتوز سلولی 29
2 -7-کشت بافت بیضه 30
2-7-1-آماده سازی آگار 30
2-7-2-آماده سازی محیط کشت 31
2-7-2-1-روش تهیه محیط RPMI 31
2-7-3-کشت بافت بیضه 32
2-8-ارزیابی ژن های آپوپتوزی 32
2-8-1-نگهداری بافت در محلول RNA-later 32
2-8-2-استخراج RNA با استفاده از ترایزول 32

2-8-2-1-هموژن کردن بافت 

2-8-2-2-مرحله ی جداسازی

33 

33

2-8-2-3-رسوب RNA 33
2-8-2-4-شستشو RNA 33
2-8-3-بررسی کیفی RNA های استخراج شده 34
2-8-4-تیمار نمونه­یRNA  با استفاده از DNase1 جهت حذف آلودگی ژنومی 34
2-8-5-سنتز cDNA 35
2-8-6-پرایمر 37
2-8-6-1-آماده سازی پرایمرها 37
2-8-6-2-بررسی جایگاه اتصال پرایمرها 39
2-8-7-الکتروفورز 39
2-8-7-1-روش ساخت بافر50X TAE 39
2-8-7-2-روش ساخت بافر X TAE1 40
2-8-7-3-طرز تهیه ی ژل آگارز 40
2-8-7-4-بررسی آلودگی پرایمر 40
-8-7-4-بررسی کیفیت RNA 41
2-8-8-بررسی گرادیانت دمایی پرایمر 41
2-8-9 Real-Time PCR 42
2-8-9-2-بررسی کمی بیان ژن با استفاده از روش Real-Time PCR

43 

 

2-9-آنالیز آماری داده 44
فصل سوم: نتایج 45
3-1-بررسی مورفولوژی بافت بوسیله رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین 46
3-2-مقایسه بقای سلولی در گروه کنترل با گروه های انجمادی I و II بلافاصله پس از ذوب 46
3-3-بررسی میزان وقوع آپوپتوز پس از کشت بافت بیضه 47
3-3-1-ارزیابی میزان بقای سلولی طی کشت بافت بیضه 47
3-3-2-آپوپتوز اولیه ی سلولی طی کشت بافت بیضه 47
3-3-3-بررسی میزان وقوع آپوپتوز پس از کشت بافت بیضه 48
3-3-4-نکروز بافتی طی کشت بافت بیضه 48
3-4-بررسی بیان ژن های آپوپتوزی در سطح رونوشت 49
3-4-1-بررسی بیان رونوشت ژن های دخیل در مسیر های آپوپتوزی 49
3-4-2-Bax 49
3-4-3-BCL2 49
3-4-4-نسبت بیان BAX به BCL2 50
3-4-5-Caspase3 50
3-4-6-Fas 50
3-4-7-Fas Ligand 51
3-4-8-P53 51
27- فصل چهارم: بحث 66
4-1-کلیات 67
4-2-بررسی های مورفولوژیک در ساعات مختلف کشت در گروه های مورد مطالعه 68
4-3-بررسی بقا و آپوپتوز سلولی در گروه های مورد مطالعه 69
4-4-بررسی بیان ژن های مرتبط با وقوع آپوپتوز در گروه های مورد مطالعه 71
4-5-نتیجه گیری 75
4-6-پیشنهادات 76

 

فهرست جداول

عنوان                                                                                                                    صفحه

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

یک مطلب دیگر :

دانلود پایان نامه حقوق با موضوع سازمان بهداشت جهانی

 

جدول 2-1-مراحل رنگ آمیزی  هماتوکسیلین ایوزین 26
جدول2-2-مشخصات پرایمرهای مورد استفاده 39
جدول 2-3-برنامه ی مورد استفاده جهت بررسی گرادیانت دمایی پرایمرها 42
جدول 3-1- میانگین بقای سلولی درگروه های کنترل، انجمادی I و انجمادی II 53
جدول3-2- میانگین بقای سلول ها در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف 53
جدول 3-3- میانگین درصد آپوپتوز اولیه ی سلول ها در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت 54
جدول 3-4-میانگین درصد آپوپتوز ثانویه ی سلول ها در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II  در ساعت های مختلف کشت 54
جدول 3-5- میانگین درصد سلول های نکروتیک در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II  در ساعت های مختلف کشت 55
جدول 3-6-میزان بیان ژن Bax در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت 55
جدول 3-7-میزان بیان ژن BCL2 در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت53 56
جدول3-8-نسبت بیان  BAX به BCL2 در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت 56
جدول3-9-میزان بیان ژن Caspase3 در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت 57
جدول 3-10-میزان بیان ژن Fas در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت 57
جدول 3-11-میزان بیان ژنLigand   Fas در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت 58
جدول 3-12- میزان بیان ژن P53 در سه گروه کنترل، انجمادی I و انجمادی II در ساعت های مختلف کشت 58

 

فهرست اشکال

عنوان                                                                                                                     صفحه

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

شکل 1-1-مسیرهای شرکت کننده در رخداد آپوپتوز 16
شکل2-1-ارزیابی بقای سلولی با روش فلوسایتومتری 28
شکل2-3-ارزیابی وقوع آپوپتوز 30
شکل3-1-داده های حاصل از آنالیز بقای سلولی با روش فلوسایتومتری در گروه های کنترل، انجمادی I و انجمادی II در زمان صفر 59
شکل3-2-داده های حاصل از آنالیز آپوپتوز سلولی با روش فلوسایتومتری در گروه های کنترل و انجمادی در ساعت صفر 60
شکل3-3-داده های حاصل از آنالیز آپوپتوز سلولی با روش فلوسایتومتری در گروه های کنترل و انجمادی در ساعت 3 پس از کشت 61
شکل3-4-داده های حاصل از آنالیز آپوپتوز سلولی با روش فلوسایتومتری در گروه های کنترل و انجمادی در ساعت 20 پس از کشت 62
شکل 3-5-بررسی مورفولوژیک بافت بیضه در گروه کنترل و گروه های انجمادی در زمان صفر بوسیله رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین 63
شکل 3-6-بررسی مورفولوژیک بافت بیضه در گروه کنترل و گروه های انجمادی 3 ساعت پس ازکشت بوسیله رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین 64
شکل 3-7- بررسی مورفولوژیک بافت بیضه در گروه کنترل و گروه های انجمادی 20 ساعت پس از کشت بوسیله رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین
موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...